Desarrollo de una PCR semianidada duplex para la deteccion de ADN de Sarcocystis aucheniae en muestras de sangre de llama

DECKER FRANCO C; ROMERO S; FERRARI A; MAMANI R; SCHNITTGER L; FLORIN-CHRISTENSEN M

Simposio; XXI Reunión Científico Técnica "Dr. Bernardo Jorge Carrillo"; 2016

Introducción: Sarcocystis aucheniae es un protozoo intracelular obligado que, en camélidos sudamericanos (CS), produce la parasitosis denominada sarcocistiosis (Carletti et al., 2013). Este parásito presenta un ciclo de vida indirecto ya que requiere de dos hospedadores, uno definitivo (cánido), donde el parásito desarrolla su estadío sexual, y otro intermediario (camélido sudamericano), donde el parásito desarrolla su estadío asexual.La sarcocistiosis de CS domésticos da lugar a la formación de quistes macroscópicos (1-5 mm) similares a granos de arroz en los músculos de estos animales. El consumo de carne infectada, cruda o insuficientemente cocida, puede producir en el hombre un cuadro de gastroenteritis que cursa con náuseas, diarreas y cólicos. Además, los quistes dan un aspecto desagradable a la carne que conduce a su desvaloración y/o decomiso, por lo que tiene un impacto negativo para las economías que dependen de este tipo de ganado. Para ayudar al control de esta parasitosis, es importante contar con métodos de detección de las infecciones previo a la faena. En un trabajo anterior, demostramos que es posible detectar al parásito en sangre de CS mediante PCR (Martin et al., 2016). El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un esquema mejorado de PCR con respecto al trabajo antes citado, para detectar simultáneamente ADN del parásito y del hospedador en muestras de sangre, con alta especificidad y sensibilidad. Asimismo, se propuso aplicar este ensayo a un estudio epidemiológico preliminar en dos regiones de la Puna Argentina productoras de CS.Materiales y Métodos: Se diseñó una PCR semianidada dúplex utilizando como secuencias blanco regiones específicas del gen 18S ARNr de S. aucheniae y el gen 16S ARNr mitocondrial de llama. El ensayo se puso a punto con muestras de ADN extraídas de quistes del parásito y músculo de llama. Luego, fue aplicado a alícuotas de sangre de llama a las que se agregaron distintas cantidades conocidas de bradizoitos de S. aucheniae. Finalmente, se utilizó este ensayo para detectar infecciones por este parásito en un total de 158 muestras de ADN extraído de sangre de llamas de las provincias de Catamarca y Jujuy, mediante un kit comercial. Los resultados obtenidos fueron tratados estadísticamente mediante el test Chi-cuadrado.Resultados: Se obtuvieron fragmentos finales de ADN correspondiente a los tamaños esperados tanto para el parásito como para el hospedador (583 y 257 pb, respectivamente). En el ensayo de sensibilidad se logró alcanzar un límite inferior de detección de 0,76 parásitos/ml de sangre. De las 158 muestras de campo analizadas, 21.52 % resultaron positivas para S. aucheniae. El análisis estadístico no mostró diferencias significativas en cuanto a edad de los animales, sexo y provincia de muestreo.Discusión: El método fue altamente sensible y específico, y aplicado con éxito a muestras de sangre de llamas de Argentina. Si bien el análisis estadístico no mostró diferencias significativas en cuanto a edad, sexo y procedencia de los animales, es necesario analizar mayor cantidad de muestras para poder hacer un relevamiento más exhaustivo de infecciones por este parásito en Argentina y países vecinos y, así conocer mejor la situación epidemiológica de la sarcocistiosis de CS.Agradecimientos: Este trabajo fue financiado con subsidios de INTA (PRET SALJU1232204) y MINCyT (PICT 2014-3747)Bibliografía:Carletti, T., Martin, M., Romero, S., Morrison, D. A., Marcoppido, G., Florin-Christensen, M., Schnittger, L. 2013. Molecular Identification of Sarcocystis aucheniae as the macrocyst-forming parasite of llamas. Veterinary Parasitology. 198, 396-400.Martin, M., Decker, C., Romero, S., Carletti, T., Schnittger, L., Florin-Christensen, M. 2016. Molecular detection of Sarcocystis aucheniae in the blood of llamas from Argentina. Rev. Argent. Microbiol. 2016, en prensa.