Evaluacion de metodos molecular de aislamientos Argentinos de Nosema ceranae

MIRA A; BASUALDO M; RODRIGUEZ G; MERKE J; GARCIA PAOLONI MS; FLORIN-CHRISTENSEN M; SCHNITTGER L

Congreso; XI Congreso Latinoamericana de Agricultura; 2014

Nosema ceranae es un microsporidio parásito de la abeja asiática Apis cerana, que ha sido recientemente detectado en la abeja europea Apis mellifera. Coloniza las células epiteliales del intestino, afectando las funciones digestivas y produce desnutrición, envejecimiento fisiológico y reducción de la longevidad. A nivel de la colonia, la nosemosis resulta en una disminución en la producción de miel, en la actividad de forrajeo y por tanto, en la polinización. El objetivo de este trabajo fue la evaluación de dos métodos de PCR para la detección molecular de N. ceranae a partir de muestras de abejas argentinas. Se trabajó en primer lugar con abejas infectadas experimentalmente con un aislamiento de N. ceranae de la provincia de Buenos Aires, conservadas en alcohol 96º por mas de un año. El contenido abdominal semi-liquido fue utilizado para el recuento de esporas en cámara de Neubauer y posterior extracción de ADN con un kit comercial. Se aplicaron dos protocolos de PCR descriptos por otros autores a diluciones seriadas de ADN, usando como secuencias blanco, segmentos de los genes codificantes de (i) el ARN ribosomal 16S y (ii) la subunidad mayor de la ARN polimerasa II. Mediante electroforesis en geles de agarosa, se verificó la obtención de productos de amplificación de los tamaños esperados. Los métodos pudieron detectar el ADN correspondiente a 15 (i) o 150 (ii) esporas, respectivamente, en 25 µl de reacción. Ambas PCRs pudieron ser también aplicadas exitosamente a muestras de abejas de otras regiones de Argentina. Dado que los dos ensayos analizados no habían sido probados previamente en muestras de Sudamérica, estos resultados aportan nuevas herramientas diagnósticas para el control de la nosemosis en abejas. Asimismo, indican que la conservación de abejas en etanol por periodos prolongados no afectaría significativamente la detección de este microorganismo. (Financiado por PNAPI 1112043, INTA).