Desarrollo y aplicacion de micro y minisatelites para la tipificacion multilocus de Babesia bovis de variado origenes geograficos

FLORES D; FLORIN-CHRISTENSEN M; PACHECO GM; PETTERSON M; SCHNITTGER L

Simposio; XXV Reunión Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2012

Babesia bovis es un hemoprotozoo, transmitido por garrapatas, que pertenece al phylum Apicomplexa. Es uno de los principales agentes causales de la babesiosis bovina, enfermedad prevalente en zonas tropicales y subtropicales del mundo, ocasionando grandes pérdidas económicas. Con el objetivo de estudiar la estructura poblacional de B. bovis, se desarrolló un sistema de marcadores moleculares basado en micro y minisatélites, también conocidos como STRs (Simple Tandem Repeats). Los STRs resultan útiles como marcadores moleculares debido a su alto polimorfismo, y a la posibilidad de diferenciar alelos por su tamaño luego de amplificación por PCR, sin necesidad de secuenciación. En un primer paso, utilizando herramientas bioinformáticas, se realizó una búsqueda de STRs en el genoma de B. bovis. Luego, se diseñaron primers específicos en las regiones flanqueantes de cada STR, y se testeó su utilidad usando tres cepas de referencia. Debido a su alto polimorfismo y confiable amplificación, se seleccionaron 21 STRs abarcando los cuatro cromosomas del parásito. Se aplicó el sistema multilocus desarrollado a la tipificación de 18 cepas de referencia provenientes de diferentes continentes, países y regiones geográficas, incluyendo America del Sur (Argentina, Brasil) y del Norte, (Mexico, Estados Unidos), Medio Oriente (Israel) y Australia. Después de la amplificación, se corrieron los productos en electroforesis vertical de alta resolución. A partir del genotipo multilocus determinado para cada aislamiento se realizó una matriz de distancia y un árbol de distancia genética. Los resultados obtenidos indican que existe una clara estructuración en las poblaciones de B. bovis entre los continentes, países y regiones geográficas estudiadas, observándose una correlación entre la distancia genética y la distancia geográfica de los distintos aislamientos. Financiado por INTA (AESA- 203961) y la Comisión Europea (INCO 245145 PIROVAC).