PRESENCIA DE UN PROFAGO EN BIZIONIA ARGENTINENSIS: INDUCCIÓN CON MITOMICINA C Y CARACTERIZACIÓN PRELIMINAR

LOPEZ JL; ARAN M; KLINKE S.; PELLIZA L.; SYCZ G.; HERNANDEZ E.; VAZQUEZ S.; MAC CORMACK W

Congreso; XVIII Congreso Latinoamericano de Ciencias del Mar-COLACMAR 2019; 2019

Losbacteriófagos y en particular los fagos temperados (lisogénicos o profagos), jueganun rol clave en la evolución microbiana, los ciclos biogeoquímicos y las enfermedadeshumanas. Proteínas virales expresadas durante el ciclo viral lisogénico conferiríana la célula infectada ventajas ecológicas. La lisogenia en bacterias marinas esun fenómeno frecuente. Durante la prospección y caracterización de productos génicosde B. argentinensis, una flabobacteria marina antártica, sedescribió la estructura molecular de la proteína C24. La cristalografía de C24,y la existencia de homólogos virales en base de datos de secuencias (GenBank)permitió hipotetizar sobre un eventual origen viral de dicha proteína. Cultivospuros de B. argentinensis fueron tratados con 0,2 µg/ml de Mitomicina Cpara inducir el ciclo lítico de eventuales fagos lisogénicos. Este experimentode inducción resultó en la lisis bacteriana [inferida por la disminución de ladensidad óptica (DO 600nm ) del cultivo tratadorespecto del control]. La progenie viral resultante fue purificada utilizando10% de PEG-8000 y 1M de NaCl en presencia de DNAasa 1. La suspensión viralconcentrada fue visualizada por microscopia electrónica de transmisión (TEM).Una alícuota de aquella suspensión fue sometida a tratamiento con proteinasa K(PK) y precipitación con etanol. El análisis de TEM mostró que la suspensiónestaba constituida casi exclusivamente por un morfotipo de fago con cola. Elgenoma viral extraído de las partículas contuvo un ADN doble cadena deaproximadamente 30 kpb. Finalmente, el gen de C24 fue amplificado por reacciónde la polimerasa en cadena (PCR) a partir del extracto de ácidos nucleicosprovenientes de las partículas virales libres de ADN genómico bacteriano.  En conclusión, la hipótesisde trabajo planteada inicialmente pudo ser confirmada experimentalmente, yefectivamente C24 está codificada por un profago integrado en el genoma de B.argentinensis. Los datos estructurales obtenidos por la cristalografía derayos X de C24 mostraron homología estructural con la proteína larga de lasfibras de la cola del fago T4, aportando una evidencia más que soporta elorigen viral de C24. Estos resultados preliminares serán complementados por laobtención de la secuencia nucleotídica completa del genoma viral, ladeterminación del rango de hospedadores in vitro para el bacteriófago,la prospección de genes virales de interés biotecnológico y la existencia demecanismos de defensa contra el fago (CRISPR-Cas) en B. argentinensis.