BIOTECNOLOGÍA APLICADA A LA PRODUCCIÓN LOCAL DE ANTIVENENO PARA ENFRENTAR EL ERUCISMO POR LONOMIA OBLIQUA

BIRENBAUM, JM; MOURA, LF; SMITH, I; MONTERO, L; POODTS, J; RODRÍGUEZ, MS; GRITTI, MA; ALONSO, LG; TARGOVNIK, AM; PEICHOTO, ME; MIRANDA, MV

CABA

Congreso; 74° Congreso Argentino de Bioquímica; 2023

Asociación Bioquímica Argentina

INTRODUCCIÓNLos accidentes provocados por orugas de Lonomia obliqua - lepidóptero venenoso presente en el nordeste argentino- representan un problema sanitario creciente y preocupante. El único antídoto disponible en la región es fabricado por el Instituto Butantan (Brasil) y consiste en anticuerpos policlonales provenientes de equinos hiperinmunizados con el veneno de las cerdas de las orugas. El veneno contiene dos componentes proteicos denominados activador del factor X (Losac, Ls) y activador de protrombina (Lopap, Lp). Nuestra hipótesis de trabajo consiste en que sería factible reemplazar el veneno completo por Ls y Lp producidas por métodos biotecnológicos para aplicar como inmunógenos en la fabricación del antiveneno.OBJETIVOS DEL ESTUDIO-Utilizar el sistema baculovirus-larvas de insectos para la producción biotecnológica de Ls y Lp. -Purificar y caracterizar Ls y Lp recombinantes.MATERIALES Y MÉTODOSLas secuencias genéticas de Ls y Lp se clonaron tras el promotor poliedrina, el péptido señal baculoviral gp64 y se adicionó una etiqueta de histidinas para su purificación por Cromatografìa de Afinidad de Iones Metálicos Inmovilizados (IMAC) y la detección por Western Blot. Los baculovirus basados en Autographa californica (rAcMNPV-Lp y rAcMNPV-Ls) fueron usados para infectar larvas de Rachiplusia nu y Spodoptera frugiperda. Se procesaron lotes de entre 35 y 50 larvas de cada especie. Lp y Ls recombinantes (rLp; rLs) se purificaron a partir de los extractos larvales por IMAC utilizando Ni como ligando. Todas las fracciones cromatográficas fueron analizadaspor SDS-PAGE y Western Blot. Se evaluó el grado de pureza obtenido en cada caso por RP-HPLC y MALDI-TOF MS. Se ensayó además el reconocimiento de las mismas con el suero del Inst. Butantan.RESULTADOS OBTENIDOSrLp y rLs fueron expresadas con actividad biológica y purificadas a partir de lotes de larvas de R. nu y S. frugiperda. Los mejores rendimientos obtenidos luego de la purificación fueron para rLp de 348 ug rLp/g larva R. nu y para rLs de 87,1 ug /g S. frugiperda. rLp y rLs fueron inmunológicamente activas y además eficientemente reconocidas por el antiveneno generado en Butantan según Western Blot.CONCLUSIONESSe desarrolló un método biotecnológico innovador, escalable y sustentable para producir las principales toxinas del veneno de L. obliqua en larvas R. nu y S. frugiperda con alto grado de pureza y rendimiento. Los resultados obtenidos son alentadores y sientan las bases para la aplicación de estas toxinas recombinantes como inmunógenos en reemplazo del veneno para la producción local del antídoto.