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Recientemente se ha aislado, a partir del veneno de la culebra sudamericana Philodryas patagoniensis, una metaloproteasa hemorrágica potente de 57,5 kDa, a la cual se le dió el nombre de patagonfibrasa. Es sabido que numerosas metaloproteasas de venenos de serpientes ejercen su acción hemorrágica degradando componentes de la pared vascular. Asimismo, la gran mayoría de ellas incrementan su potencial hemorrágico gracias a sus acciones sobre otros componentes del sistema hemostático. En trabajos previos se demostró que patagonfibrasa degrada fibrinógeno, volviéndolo incoagulable por la trombina. Debido a que las plaquetas también constituyen una parte vital del sistema hemostático, estando sujetas a varias formas de ataque por parte de agentes exógenos, en este trabajo se evaluó el impacto de patagonfibrasa sobre las plaquetas sanguíneas. Por tal motivo, se llevó a cabo la administración intravenosa de patagonfibrasa (15 μg) en ratones, detectándose, 1 hora después de la inyección, un retraso significativo en el tiempo de sangría (> 30 min; control: 3 min). Por lo tanto, la enzima en estudio retrasa la formación del trombo rico en plaquetas. Con el fin de conocer si patagonfibrasa es capaz de afectar las funciones plaquetarias, se realizaron ensayos de adhesión y de agregación de plaquetas lavadas o plasma rico en plaquetas en presencia de la enzima. Los ensayos de adhesión realizados en microplacas recubiertas con colágeno mostraron que patagonfibrasa inhibe la adhesión plaquetaria de manera dependiente a su concentración, obteniéndose un 50 % de inhibición con una concentración final de 674 nM de la enzima (CI50). Por otro lado, patagonfibrasa, hasta una concentración final de 174 nM, no indujo agregación plaquetaria per se cuando se agregó a una suspensión de plaquetas humanas lavadas; sin embargo, sí inhibió la agregación plaquetaria inducida por colágeno de manera dependiente a su concentración, hallándose un valor de CI50 de 129 nM. La inactivación de la enzima con Na2EDTA 121 µM (concentración final) no produjo ninguna alteración sobre esta inhibición. Cuando se preincubaron colágeno 1 µg/mL y patagonfibrasa 5 µg/mL (concentraciones finales) a 37 ºC durante 5 min, la agregación plaquetaria inducida por colágeno se desencadenó de modo similar a cuando el agonista se adicionó luego de 2 min de incubación de una suspensión de plaquetas humanas lavadas con patagonfibrasa. Adicionalmente, esta enzima a una concentración final de 174 nM causó un 64 % de inhibición de la agregación plaquetaria inducida por ADP. Esta inhibición aumentó a un 93 % luego de preincubar la proteína con fibrinógeno a 37 ºC durante 2 min. Finalmente, la enzima en estudio no inhibió las agregaciones plaquetarias inducidas por trombina, ristocetina (hasta una concentración final de 174 nM), convulxina o A23187 (hasta una concentración final de 65 nM). Este estudio constituye el primer relato sobre la caracterización de un inhibidor de la adhesión y de la agregación plaquetaria aislado a partir del veneno de una culebra. La actividad inhibidora sobre la adhesión y la agregación plaquetaria inducida por colágeno podría resultar de la unión de patagonfibrasa a la integrina α2β1, lo cual está siendo investigado actualmente. Con respecto a la agregación plaquetaria inducida por ADP, la enzima en estudio probablemente inhibe tal agregación por dos vías: destruyendo fibrinógeno intacto, ya que posee actividad fibrinogenolítica, y consecuentemente generando productos de degradación del fibrinógeno que actúan como inhibidores competitivos en la formación de los puentes de unión entre plaquetas y fibrinógeno.

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