Otras especies leñosas expresan diferencialmente secuencias nucleotídicas similares a la yerba mate (Ilex paraguariensis) ante una situación de estrés hídrico.

ACEVEDO, M.; DISTEL, M.; SANSBERRO, P.

Corrientes

Jornada; XXII Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas.; 2010

Fac. Ciencias Agrarias (UNNE)

 Ilex paraguariensis (yerba mate) es una planta arbórea que en estado silvestre crece formando parte del sotobosque. Requiere temperaturas tropicales o subtropicales y una elevada humedad ambiente, así como frecuentes precipitaciones del orden de los 1.500 mm anuales. Su explotación comercial se realiza de manera extensiva; motivo por el cual, las plantas están expuestas a condiciones ambientales, disímiles a su hábitat natural, caracterizadas por altas radiaciones luminosas, mayor amplitud térmica y menor contenido de agua en el suelo. En tal escenario, resulta necesario indagar los mecanismos de señalización involucrados en la respuesta al factor estresante con el propósito de forjar su eventual aplicación en los planes de mejoramiento de la especie. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar genes que se expresen en forma diferencial en el ámbito de las hojas de yerba mate (Ilex paraguariensis) sometidas a sequía mediante el empleo de la técnica de expresión diferencial (DD RT‐PCR). Plantas regadas periódicamente, fueron sometidas a estrés hídrico suspendiendo el riego hasta alcanzar un potencial agua en el suelo de ‐0.4, ‐1.0, ‐2.0 y ‐3.0 Mpa. Se recolectaron muestras foliares las que posteriormente fueron molidas con nitrógeno líquido extrayéndose el ARN total con un kit comercial (Promega). La síntesis de ADNc de cadena única se realizo por transcripción inversa a partir de la fracción de ARN poliadenilado (ARNm), utilizando un cebador del tipo T12XY, complementario a la cola poli A. Esta fracción de ADNc se amplifico por PCR utilizando como cebadores, el mismo T12XY, y un oligonucleótido de 10 bases de secuencia aleatoria. Se obtuvo una población de fragmentos de ADNc de doble cadena, de distintos tamaños; que se separaron por electroforesis en geles de poliacrilamida, y se tiñeron con AgNO3. La banda diferencial se separó del gel, eluyéndose el ADN para su posterior amplificación por PCR con los cebadores antes mencionados. Seguidamente, cada fragmento de interés fue clonado en un plásmido comercial (pGEM) y enviado para su secuenciación a Macrogen Inc. (Corea). La secuencia fue analizada en busca de similitud con la herramienta BLAST del National Center for Biotechnology Information, NCBI. Se observaron bandas diferenciales en plantas sujetas a una condición severa de estrés (potencial agua suelo: ‐2 y ‐3 MPa), cuya secuencia nucleotídica (482 bases), mostró similitud significativa (Score = 114; E value = 3.10‐22) con las secuencias de Populus tremula x Populus alba y Vitis vinífera que se expresan en similares condiciones estresantes. Asimismo, su secuencia aminoacídica resultó similar a varias proteínas hipotéticas caracterizadas en los mismos géneros. Este hecho estaría indicando que probablemente genes de respuestas a estrés hídrico podrían estar difundidos en las especies leñosas.