Estudios sobre las isoformas de la cruzipaína, cisteína proteinasa principal del Trypanosoma cruzi. (Comunicación Oral)

VILMA G. DUSCHAK; FABIOLA PARUSSINI; JUAN JOSÉ CAZZULO

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas y Biología Molecular.; 1995

Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas y Biología Molecular

La cruzipaína se obtiene coma una mezc1a compleja de isoformas, detectables, aunque hasta ahora no completamente separables, por cromatagrafia de intercambio iónico en Mono Q, por isoelectroenfocado y cromatoenfocado y por HPLC en fase reversa, así coma por SDS-PAGE en geles conteniendo gelatina coma sustrato. Las causas de estas microheterogeneidades estarían en a) la posible expresión simultánea de varios de los numerosos genes que codifican a la enzima (de 50 a 130, segun la cepa del parásito), pues se han detecado reemplazos de aminoacidos en distintos· genes, con cambios en el pI predicho; b) diferencias,en la cadena de oligosacarido en  la Asn 254 del dominio C-terminal; c) diferentes modlficaciones post-traducclonalesen diferentes moléculas. Hemos progresado en la separación parcial de isoformas en columnas de Mono Q y de Mono P; hemos detectado una isoforma no retenida por la ConA-Sepharosa, y que por 10 tanto debe diferir en glicosilación; y hemos confirmado  que la cruzipaina extraíble con concentraciones crecientes de digitonina a partir de células enteras llega a un máximo del 80-% del total. Esto sugiere que la enzima se encuentra en dos compartimentos subcelulares diferentes; la composición en isoformas detectable por SDS-PAGE con sustrato y por Western blot parece ser igual en los extractos y en los precipitados. La enzima presente en la fracción particulada es extraible conTritón X-114, y, por partición de fases, se concentra en la fase de detergente. El tratamiento con fosfolipasa C la libera a la fase acuosa, lo que hace suponer que estaría ligada a la membrana por un anc1a de glicosilfosfatidilinositol.