Implementación de la técnica de cristal violeta para la determinación de biofilm microbianos sobre material particulado no degradable

GARCÍA N.; SEPULVEDA M.A.; REVUELTA F.; DEL BRIO F.; OLIVERA N.L.; NIEVAS M.L.

Trelew

Jornada; III Jornadas Patagónicas de Biología, II Jornadas Patagónicas de Ciencias Ambientales; 2015

Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco

Losbiofilms son conglomerados de poblaciones microbianas simples o multiespecie,que crecen adheridas a una superficie a través de una sustancia poliméricaextracelular. Los sistemas de tratamiento de efluentes utilizanbiocatalizadores con biofilms microbianos porque poseen mayor eficiencia debiodegradación que las células planctónicas. Los biofilms se cuantifican con variasmetodologías, entre ellas, mediante tinción de la matriz polimérica con cristalvioleta (CV) y detección espectrofotométrica. Esta técnica se usa generalmentecon microorganismos que crecen en medios líquidos ricos y homogéneos. Elobjetivo de este trabajo es evaluar la factibilidad de utilizar la técnica deCV para cuantificar biofilms microbianos sobre sólidos particulados nobiodegradables en medios líquidos bifásicos agua-hidrocarburos. Para ello, seutilizó grava (500-1000 µm) y carbón granular activado (CGA) (250-500 µm y1000-2000 µm) como soportes para la formación de biofilm. Se evaluó en primertérmino la absorción de CV de los soportes solos, a fin de seleccionar laconcentración inicial de colorante. Se encontraron diferencias significativas(DS) en la absorción de CV respecto al material, en orden creciente deabsorción de CV, entre los tubos de ensayo, la grava y el CGA, pero no entrelos CGA debido a su granulometría. Los coeficientes de variación fueron delorden del 20-25% para todos los soportes (n=6) para concentraciones de CV de0,025 y 0,1 %. Posteriormente, se evaluó la capacidad de formar biofilm sobreestos soportes de un consocio microbiano y de Pseudomonas sp. (RS02), ambos degradadores de hidrocarburos yformadores de biofilm, en medio mínimo líquido con n-hexadecano y el soporte deprueba durante 7 días con agitación orbital. La sensibilidad de la técnica noresultó suficiente para detectar el biofilm en las condiciones de cultivosensayadas. Se plantea evaluar a futuro nuevamente esta metodología utilizandomayores tiempos de crecimiento de los microorganismos.