Aplicación de técnicas de biología molecular en el estudio de sistemas detoxificantes en adultos de Cydia pomonella

PARRA LAURA; CICHON LILIANA; GARRIDO SILVINA; MONTAGNA MONICA; GUIÑAZÚ NATALIA

Mendoza

Congreso; X Congreso Argentino de Entomología; 2018

Sociedad Argentina de Entomología

El Alto Valle de Río Negro y Neuquén es una zona productora de peras y manzanas, su principal plaga es Cydia pomonella (Linneaus) (Lepidoptera; Tortricidae). El control de la plaga se realiza con diferentes insecticidas dirigidos a las larvas neonatas. Este estadio coexiste con adultos, encontrándose éstos últimos expuestos a concentraciones subletales de insecticidas. El estrés causado por estos químicos, en estas condiciones puede aumentar tanto la tasa de mutaciones como la actividad del sistema de detoxificación. La modulación de la expresión de enzimas detoxificantes, como citocromo P450 y carboxilesterasas, es un mecanismo frecuente de resistencia en insectos.El objetivo de este trabajo fue poner a punto técnicas moleculares para evaluar la resistencia mediante el nivel de la expresión génica de enzimas detoxificantes en adultos de C. pomonella.Se analizaron los niveles de expresión basal de citocromo P450 (CYP9A61) y carboxilesterasas (Cp-CE1) en adultos de C. pomonella provenientes de una población de campo (PC) y una cepa susceptible de laboratorio (CSL). Se utilizaron adultos de 1-2 días de edad, conservados a -80 °C hasta su utilización. Por individuo, se realizó la extracción de RNA total (TRIzol reagent). Posteriormente se determinó la integridad del RNA mediante electroforesis en gel de agarosa y la concentración por métodos espectrofotométricos a 260/280 nm. Para la obtención de DNA copia, se retrotranscribió 2 μg de ARN, utilizando cebador oligo DT. Para la reacción de PCR, se utilizaron cebadores disponibles en la bibliografía para CYP9A61 (KC:832920.1) y Cp-CE1 (KC:832922.1) de C. pomonella. Los amplicones fueron visualizados en geles de agarosa mediante el colorante gel Red. En todos los ensayos se incluyeron controles negativos. Los niveles relativos de expresión de los transcriptos fueron determinados por comparación con un control interno de expresión constitutiva como beta-actina (KC832921) de C. pomonella.Los resultados mostraron la expresión de CYP9A61 y Cp-CE1, indicando la posible aplicación de una técnica rápida y altamente sensible para determinar niveles de expresión en genes que codifican enzimas que confieren resistencia a plaguicidas y por lo tanto la detección temprana de individuos resistentes. Estos estudios son la base para realizar la determinación cuantitativa de los transcriptos por qPCR.