ANÁLISIS DE LA ESPECIFICIDAD DE ANTICUERPOS COMERCIALES ANTI-RECEPTOR MAS

VALERIA BURGHI; IVAN CERVIÑO; MAZZIOTTA L; ECHEVERRIA EMILIANA; FERNANDEZ NATALIA CRISTINA; DOMINICI FERNANDO PABLO; MARINA C MUÑOZ

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) 18-21 de noviembre de 2015 Hotel 13 de Julio ? Mar del Plata; 2015

SAIC-SAFIS

En los últimos años se ha incrementado el número de publi-caciones que basan sus hallazgos en la utilización de anticuerpos cuya especificidad no ha sido validada. Esta observación es principalmente notoria en el caso de estudios de proteínas que se expresan en bajos niveles, como los receptores acoplados a proteínas G (GPCRs). Nuestro grupo estudia el sistema renina angiotensina (SRA), particularmente el eje que involucra a la enzima convertidora de angiotensina de tipo 2, la angiotensina (1-7) y el receptor Mas (MasR). Dicho receptor pertenece a la familia de GPCRs, está constituído por 324 aminoácidos, con una masa molecular estimada de 37 kDa y es específico para la angiotensina-(1-7). El objetivo de este estudio fue determinar la especificidad de cuatro anticuerpos comerciales anti MasR, siguiendo una serie de criterios de especificidad establecidos para una adecuada validación de dichos anticuerpos. Para ello, utili-zando anticuerpos comerciales dirigidos contra diferentes epitopes del MasR, se sometieron dos sistemas de expresión del MasR a las técnicas de Western Blotting (WB) e inmunocitofluorescencia (ICF). Mediante WB y RT-PCR, se investigó la presencia del MasR en corazón y riñón de ratones normales. El patrón de bandas de-tectado fue idéntico al obtenido por análisis de tejidos de ratones que no expresan el MasR (MasR-KO). A su vez, la intensidad de las bandas obtenidas mediante WB en solubilizados de células HEK293 en las que se sobreexpresó el myc-MasR no correla-cionó con los diferentes niveles de expresión de dicho receptor. Finalmente, al analizar mediante ICF la presencia del MasR en estas células utilizando los anticuerpos anti MasR se observaron patrones de expresión diferentes a los que se obtuvieron con un anticuerpo anti-myc. Se concluye que los anticuerpos comerciales anti-MasR utilizados con mayor frecuencia no cumplen con los principales criterios de especificidad establecidos y su utilización puede conducir a conclusiones erróneas.