Diseño de ?primers? para el organismo no modelo Rhinella arenarum: una estrategia útil

CESCHIN D.G.; MARDIROSIAN M.; GUERREÑO M.; VENTURINO A

Neuquén

Congreso; V Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental, SETAC Argentina; 2014

SETAC Arg

Cerca del 50% de los plaguicidas aplicados en cultivo se dispersan en el ambiente sin alcanzar los blancos pretendidos, pudiendo llegar una proporción muy alta a canales de riego y lagunas, entre otros. Los biomarcadores permiten monitorear de manera muy sensible los efectos de tóxicos sobre organismos expuestos. En nuestro laboratorio se han definido marcadores bioquímicos relacionados con neurotoxicidad, estrés oxidativo y detoxificación para la especie autóctona R. arenarum como modelo bioindicador. Sin embargo, existe la necesidad de definir nuevos biomarcadores tempranos más específicos, sensibles y unívocos de las respuestas toxicológicas. La evaluación de la expresión de genes podría constituir una buena posibilidad a estos requerimientos. No obstante, la falta de secuencias de referencia para organismos no modelo dificulta la utilización de metodologías para la evaluación de genes de interés. En este trabajo, presentamos la estrategia que utilizamos para el diseño de primers para ACHE, GSR, GSTP1, AMD1 y SAT1 de R. arenarum. Para ello, inferimos que secuencias proteicas y génicas conservadas entre organismos taxonómicamente alejados también estarían conservadas en este organismo. Así, se obtuvieron las secuencias de referencia de aminoácidos (aa) y nucleotídicas (ARNm) de H. sapiens, R. norvegicus, M. musculus, B. taurus, M. mulatta, G. gallus, D. rerio, X. tropicalis y X. laevis. Luego, se realizó el alineamiento múltiple para las secuencia de aa y de ARNm para cada gen de interés. Seguidamente se identificaron los bloques conservados para aa, su correspondencia en el ARNm, y se diseñaron los respectivos primers. Para validar la estrategia, se realizaron ensayos de PCR utilizando ARN de hígado y corazón de R. arenarum, obteniendo los respectivos productos de amplificación. Por lo tanto, la estrategia utilizada es válida para el diseño de primers para evaluar la expresión de genes en R. arenarum, pudiendo ser extensible a otros organismos no modelo.