Modulación por poliaminas de la actividad in vitro de acetilcolinesterasa de anguila. Aplicación de modelos cinéticos sobre el mecanismo de acción

VENTURINO A; ROSENBAUM E; BERGOC R.M.; PECHEN DE D'ANGELO A.M

Huerta Grande

Congreso; XXVII Reunión Anual de la SAIB; 1991

SAIB

La Acetilcolinesterasa (AChE) es una enzima cuyo mecanismo de acción ha sido ampliamente estudiado~ habiéndose encontrado sitios regulatorios para ca­tiones del tipo amonio 4rio. Kossorotow et al~ han propuesto un rol regulatorio para las poliaminas (PAs) in vivo a partir de estudios cinéticos sobre AChE de eritrocito (Biochem.J.144:21-27(1974}}. Hemos observado que las PAs aceleran la hidrólisis espontánea del sustrato acetiltiocolina (ATC)~ por lo cual estudiamos el efecto de espermina (Spm} sobre la AChE prestando particular atención a esta acción. A partir del ajuste de los datos por regresión no lineal hemos testeado modelos cinéticos que consideran también la inhibición por sus trato típica que presenta esta enzima. La actividad de AChE se determinó por el método de Ellman. La interacción de Spm y ATC en ausencia de enzima acelera 140 veces la hidrólisis espontánea de ATC. Hemos constatado que la Spm modula la actividad de AChE en forma dual, inhibiendo/activando a bajas/ altas concentraciones de sustrato. Los modelos que presentaron mejor ajuste de datos justifican: a)Un aumento en la Vm app por Spm debido al incremento de kcat (2X) más que a la pérdida de afinidad del sustrato por el sitio inhibitorio (3X) ya que ésta es mayor para el cata11tico (12X)= b)La inhibición de AChE por Spm a bajo sustrato a través de la disminución de la afinidad por el sitio catalítico. Alternativamente, el considerar al complejo Spm­ATC como sustrato sugiere que su afinidad por AChE es mucho mayor que ATC. Sin embargo la Kd obteni­da para la formación de este complejo (~ 300 mM), no permite sacar conclusiones definitivas.