Capacidad crioprotectora de diluyentes hipertónicos sobre semen de carnero congelado- descongelado: niveles de glutatión y peróxidos

QUINTANA M.M; MEDINA V.H; AISEN E.G; VENTURINO A

Mendoza

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la SAIB; 1998

SAIB

La inseminación artificial por vía cervical en ovinos ha requerido el desarrollo de criopreservadores adecuados, ya que los diluyentes empleados en bovinos han dado bajos rendimientos. En nuestro laboratorio hemos desarrollado, con buenos resultados, crioprotectores hipertónicos en base a trealosa. Presentamos los resultados de protección al descongelado y termorresistencia a 39°C del diluyente isotónico base (B) de Salamon, y dos hipertónicos con 110 mOsm trealosa sola (T) o con EDTA 2.5 mM (TE). Evaluamos motilidad individual e integridad acrosomal por microscopía de contraste de fase. Medimos glutatión reducido (GSH) y total (GSH+GSSG) en espermatozoide y medio de descongelado, y peróxidos en extracto lipidico. T y TE ptesentaron una motilidad individual significativamente mayor que B al descongelado (67% vs 58%) y luego de 4 h de termorresistencia (37% vs 25%), mientras que a 9 h sólo hubo motilidad en TE (35%). La integridad acrosomal fue semejante para los 3 diluyentes al descongelado, mientras que a las 4 h a 39°C se obtuvo TE>T>B (61, 44 y 33% respectivamente). GSH en espermatozoide fue un 13% mayor para T y TE respecto a B al descongelado, y un 47% mayor luego de 3 h. No se observaron diferencias significativas en el GSH extracelular. El contenido de GSH+GSSG fue similar para los 3 diluyentes. La producción de peróxidos fue muy variable entre muestras, sin observarse diferencias significativas. Adjudicamos la capacidad crioprotectora de trealosa a su capacidad deshidratante y a su interacción con la membrana. La acción de EDTA estaría relacionada con la remoción de Ca2+, que puede competir con trealosa en su unión a la membrana, y es esencial para desencadenar la reacción acrosomal. El consumo de GSH en ausencia de trealosa puede estar relacionado a una mayor liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS), con oxidación a GSSG. Los resultados preliminares de producción de peróxidos sugieren que el GSH puede evitar el daño de membranas por ROS en las condiciones indicadas hasta las 3 h.