PARTICIPACIÓN DE LA VÍA DE MAPK Y DEL ESTRÉS OXIDATIVO EN LA ACCION ANTIPROLIFERATIVA DEL CLORPIRIFOS EN CÉLULAS DE MELANOMA

VENTURA, C; MIRET, N.; VENTURINO A; RANDI, A; RIVERA, E; NÚÑEZ, M; COCCA, C

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

SAIC

En presentaciones previas mostramos que el insecticida clorpirifos (CPF) disminuye la proliferación celular y altera el balance redox en líneas celulares derivadas de melanoma con diferente grado de diferenciación. HIPOTESIS: En células de melanoma la acción anti-proliferativa del CPF es mediada por alteraciones redox y la desregulación de la vía MAPK. OBJETIVO: estudiar la acción de la vía de MAPK y el estrés oxidativo sobre inhibición de la proliferación inducida por el pesticida. METODOLOGIA: En las líneas WM35 y M1/15 derivadas de melanoma expuestas a CPF (0,05 - 50 µM), evaluamos: la proliferación por recuento clonogénico, las especies reactivas del oxígeno (ERO) por citometría de flujo con la sonda DCF-2DA, la peroxidación lipídica por cuantificación de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico. La actividad catalasa (CAT) y el contenido de glutatión (GSH) se evaluaron por espectrofotometría. La fosforilación de ERK1/2 se evaluó por Western blot. RESULTADOS: El CPF 50 µM inhibió la proliferación en un 45,9 ± 17,2% en WM35 (p<0,05) y 44,9 ± 8,7% en M1/15 (p<0,01) e incrementó los niveles de ERO en un 76,0 ± 23,1% en WM35 (p<0,01) y 59,3 ± 13,4% en M1/15 (p<0,05). En la línea WM35, este aumento revirtió por el agregado de CAT. El CPF incrementó la actividad CAT en la línea WM35 (30,6 ± 9,7%; p<0,05). El daño celular solo se evidenció en la línea M1/15 (117 ± 24,9%, p<0,01). El CPF 50 µM indujo ERK1/2-P en las células WM35 (375 ±35%) sin cambios en la línea M1/15. CAT revirtió el efecto del CPF 50 µM sobre la proliferación celular en ambas líneas. El inhibidor de MAPK (PD98059) revirtió el efecto del CPF sobre la proliferación en la línea WM35. CONCLUSION: El H2O2 participa de la inhibición de la proliferación inducida por el CPF 50 µM en ambas líneas. Las MAPKs solo se afectaron en las células WM35 expuestas al tóxico sugiriendo que esa vía participa en la inhibición de la proliferación inducida por el CPF en esta línea.