Efecto de la fosforilación de ERK1/2 en la inhibición de la proliferación celular inducida por el pesticida Clorpirifos en líneas celulares tumorigénicas mamarias

VENTURA, C; MIRET, N.; VENTURINO A; RANDI, A; RIVERA, E; NÚÑEZ, M; COCCA, C

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

SAIC

Hemos demostrado que el pesticida de uso común clorpirifos (CPF) 50 µM inhibe la proliferación e incrementa los niveles de especies reactivas del oxígeno (ERO) en las células MCF-7 y MDA-MB-231. Hipótesis: el CPF inhibe la proliferación celular a través de la vía de las MAPKs mediada por estrés oxidativo. Objetivo: analizar el efecto del CPF sobre el sistema redox y su relación con MAPKs. Metodología: Evaluamos proliferación por recuento clonogénico; las ERO y las especies reactivas del nitrógeno (ERN) por citometría de flujo utilizando las sondas DCF-2DA y DAF-2DA; la peroxidación lipídica por cuantificación de TBARS; las actividades de catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD), Glutatión Transferasa (GST) y niveles del glutatión reducido (GSH) por espectrofotometría; y la fosforilación de ERK1/2 por Western Blot. Resultados: Después de 24 h, el CPF 50 µM incrementó los niveles de ERN (23,0 ± 4,3%, p<0,05) en MDA-MB-231 y las actividades CAT y GST en ambas líneas celulares (CAT: 36,6 ± 9,2% y 99,0 ± 10,3% para MCF-7 y MDA-MB-231 respectivamente, p<0,05. GST: 156,9 ± 40,4% y 32,6 ± 23,3%, para MCF-7 y MDAMB-231 respectivamente, p: ns); disminuyó la actividad SOD en un 57,1 ± 13,8% (p<0,05) e incrementó la peroxidación lipídica en las células MCF-7 (50,4 ± 9,7%, p<0,05). El CPF no modificó los niveles de GSH. A los 15 min el pesticida incrementó la fosforilación de ERK1/2 en ambas líneas (50,0 ± 14,1%, p<0,05 y 56,9 ± 4,2%, p<0,01 en MCF-7 y MDA-MB-231 respectivamente) junto con un rápido incremento de las ERO (46,4 ± 7,6% en MCF-7 y 77,5 ± 7,8% en MDA-MB-231, p<0,05). La inhibición de la proliferación producida por el CPF a las 24 h revirtió por el agregado exógeno de CAT y por el inhibidor de las MAPK, PD98059. Finalmente, el agregado de CAT a los cultivos revirtió la fosforilación de ERK1/2 inducida por el CPF. Conclusión: el CPF incrementa la generación de ERO y ERN conduciendo a la fosforilación de ERK1/2 y derivando en la inhibición de la proliferación.