Identificación de genes involucrados en la resistencia a péptidos microbicidas en Salmonella

MARTÍN ESPARIZ; MARÍA N. LA HOZ; SILVANA V. SPINELLI; FERNANDO C. SONCINI

Rosario, Santa Fe, Argentina.

Congreso; IV Congreso Rosarino, XX reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2000

Sociedad de Biología de Rosario.

Producción de péptidos catiónicos con actividad microbicida es una estrategia de defensa primaria contra posibles organismos patógenos empleada por diversas especies; entre las que se encuentran mamíferos, anfibios e insectos. Por otro lado ciertas bacterias patógenas han desarrollado mecanismos de resistencia que les permiten contrarrestada actividad de estos péptidos microbicidas, y así prosperar en el proceso infeccioso. En Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) se han identificado sistemas específicos de transducción de señales responsables de la regulación de la resistencia a péptidos microbicidas. Uno de estos sistemas, PhoP/PhoQ, controla resistencia a defensinas, magaininas, cecropinas, mastoparan y protamina entre otros péptidos. El sistema PhoP/PhoQ controla a nivel transcripcional la expresión de una serie de factores necesarios para sobrevivir dentro del hospedador infectado. Algunos de estos factores serían responsables del incremento de la resistencia a diversos péptidos microbicidas. Sin embargo, hasta el momento no han podido ser identificados. Con el objeto de aislar y caracterizar nuevos genes implicados en la resistencia a péptidos microbicidas en S. typhimurium, hemos analizado una biblioteca de 20.000 mutantes insercionales obtenida con el transposón MudJ. En cada mutante hemos ensayado la resistencia a protamina, comparada con la resistencia de la cepa salvaje. De este análisis obtuvimos 22 cepas sensibles al péptido microbicida. Por el perfil de sensibilidad a protamina, tanto en medio sólido como líquido, pudimos clasificarlas al menos en 3 grupos, sugiriendo que las mutaciones afectaron a genes diferentes. Utilizando la técnica de PCR determinamos si alguna de las inserciones se encontraban en genes previamente caracterizados que confieren resistencia a protamina. Identificamos inserciones en phoPQ, y en el operón sap, indicando que nuestro rastreo fue exhaustivo. Se comenzó además con la determinación de la secuencia cromosomal adyacente a cada inserción, con el objeto de identificar los loci afectados por el transposón. Estos resultados nos permiten afirmar que la metodología empleada en este trabajo es efectiva para la identificación de nuevos·loci responsables de la resistencia a péptidos microbicidas en Salmonella.