Anticuerpos anti-galactosa en pacientes chagásicos y su purificación en una columna de agarosa

RISSO MARIKENA; MARCIPAR IVAN; SILBER ARIEL; MARCIPAR ALBERTO

Sierra de la Ventana, Buenos Aires, Argentina

Congreso; V Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 1997

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

Los anticuerpos anti-galactosa son anticuerpos naturales, cuyo nivel en suero se encuentra aumentado en pacientes que padecen infecciones por agentes como Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus y Trypanosoma cruzi, entre otros. Entre los determinantes antigénicos más significativos que T. cruzi presenta al sistema inmune se encuentran los residuos galactosil de los glicoconjugados de membranas. Dado que la agarosa es un polímero de galactosa (D-galactosa alternada con 3,6-anhidro-L-galactosa), se decidió evaluar la capacidad de esta matriz como superficie de captura para anticuerpos anti-galactosa de sueros de pacientes chagásicos por inmunoafinidad, para su posterior caracterización. Estos anticuerpos fueron purificados fraccionando mezclas (pools) de sueros provenientes de pacientes chagásicos crónicos en columnas de agarosa. Se eluyó por desnaturalización con solución de glicina- ácido clorhídrico de pH 2,5. El material eluido de la columna fue corrido en gel de poliacrilamida con SDS. Se observaron únicamente las bandas correspondientes a las cadenas pesada y liviana de los anticuerpos (aproximadamente 60 y 40 kDa respectivamente). Mediante el uso de conjugados isotipoespecíficos se determinó por ELISA la presencia de anticuerpos de tipo IgG en las fracciones eluidas. Se comprobó que a partir de las mezclas de sueros de pacientes chagásicos la cantidad purificada de anticuerpo fue superior que la obtenida siguiendo el mismo protocolo con un pool de sueros de individuos no chagásicos. La presencia de niveles basales de anticuerpos contra estos azúcares en sueros de personas no infectadas por T. cruzi se debería a que durante la maduración del sistema inmune aparecen anticuerpos reactivos contra los residuos glucídicos de las bacterias constitutivas de la flora intestinal. Estos anticuerpos contribuirían a la inmunidad llamada innata o natural. Se está procediendo al mapeo de la especificidad de estos anticuerpos por ensayos de competencia con azúcares solubles, así como a un estudio de la contribución de estos anticuerpos a la modulación de la respuesta frente a la infección en el huésped.