ALGORITMO DIAGNOSTICO DE LEISHMANIASIS AMPLIADO A LA TIPIFICACIÓN DE ESPECIE INFECTANTE

SAGGION GIULIANA; PARRA CARLOS; RISSO MARIKENA GUADALUPE; LAUTHIER JUAN JOSE; SALGUEIRO DIAZ VICTORIA; PISAREVSKY ANDREA; FOCCOLI MONICA; ASTUDILLO GERMAN; ECHAZARRETA SOFIA; REPETTO SILVIA ANALÍA; RUYUBAL PAULA

Congreso; I Congreso INFIBIOC - "Superando las fronteras de la medicina traslacional"; 2023

Las leishmaniasis son enfermedades causadas por parásitos protozoarios transmitidos através de las picaduras de flebótomos infectados. Son endémicas en más de 98 países, afectandoen gran medida a las poblaciones con menores recursos de la mayoría de las regiones tropicales ysubtropicales. Estas enfermedades pueden ser asintomáticas o manifestarse según tres síndromesclínicos principales (leishmaniasis cutánea; mucocutánea y visceral) que surgen a partir de lainfección con diferentes especies del parásito y de acuerdo a su tropismo principal en el humano.En los últimos años, los reportes de leishmaniasis han ido en aumento en todo el mundo,principalmente asociado a la creciente movilidad de la población. Para prevenir la expansión decasos a áreas no endémicas se deben implementar estrategias epidemiológicas que incluyan undiagnóstico rápido y específico. En este trabajo, se estandarizó una estrategia diagnóstica basada en una PCR para la amplificación específica de regiones del minicírculo del kDNA de Leishmania spp.. El objetivo principal fue el de aumentar la sensibilidad de detección molecular respecto a la técnica de tipificación ya puesta a punto en el laboratorio, que tiene como target al gen nuclear hsp70 de bajo número de copias (5 a 10 copias por genoma). Las ventajas de utilizar regiones de los minicírculos del kinetoplasto como blanco para una PCR incluyen su alto número de copias (alrededor de 10.000 copias por parásito) y su naturaleza conservada, que permite el diseño de primers específicos para una amplia gama de especies de Leishmania. Esto facilitó la creación de un algoritmo que optimiza la detección (PCR kDNA) y la determinación de la especie infectante (nPCR HSP70) para una determinación rigurosa de las recomendaciones terapéuticas, el tratamiento y el seguimiento clínico a aplicar en cada paciente.Para lograr este objetivo, se evaluaron las condiciones de ciclado y la composición de lamezcla de reacción de la PCR de manera de optimizar la sensibilidad y especificidad deamplificación del kDNA de Leishmania spp.. Se aseguró que el protocolo permitiera el diagnósticodiferencial respecto de la enfermedad de Chagas y de distintas micosis que comparten áreaendémica y/o sintomatología. Por otra parte, se realizaron ensayos de sensibilidad analítica paralas especies de Leishmania prevalentes en Argentina, demostrando que el protocolo tiene límitesde detección más bajos y, porlo tanto, más sensibles que la PCR HSP70.Para analizar su desempeño, el protocolo estandarizado fue evaluado en muestras depacientes con sospecha de leishmaniasis mediante un análisis de precisión diagnóstica. Lasensibilidad y especificidad del protocolo fueron del 66,6% y 78,9%, respectivamente. Aunque lasensibilidad obtenida fue considerable, no alcanzó un nivel muy elevado. Sin embargo, sedemostró que la técnica es altamente específica para detectar Leishmania, con un valor predictivopositivo (VPP) del 80%. Por otro lado, se completó el algoritmo propuesto con la determinación dela especie infectante en las muestras positivas, identificando infecciones por L. (V.) braziliensis, L.(V.) guyanensis, L. (V.) panamensis y L. (L.) mexicana. Se demostró efectividad en la detección deespecies no contempladas en la estandarización de la técnica, lo que enfatiza su utilidad en eldiagnóstico de leishmaniasis en pacientes que viajan a diferentes regiones del mundo.En conclusión, el protocolo estandarizado constituye una herramienta prometedora paralograr un diagnóstico sensible y específico de las leishmaniasis en la región, siendo además defácil implementación en zonas endémicas con recursos limitados en el área de salud.