Evaluación del efecto de (+) Carvona y (-) Carvona sobre el receptor GABAA, en cultivos primarios neuronales.

MARIELA SÁNCHEZ; DANIEL GARCÍA

Casilda

Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2012

Sociedad de Biología de Rosario

El receptor GABAA constituye el principal receptor inhibitorio del Sistema Nervioso Central y es el destino específico de barbitúricos, neuroesteroides, etanol, anestésicos, Zn+ así como de agentes neurotóxicos y convulsivantes como la picrotoxinina. Los diferentes lugares de reconocimiento no son independientes entre sí, sino que la ocupación de cualquiera de ellos produce modificaciones alostéricas en los otros sitios (Macdonald et al., Annu Rev Neurosci, 1994, 17:569; Whiting, Neurochem Int, 1999, 34:387). En general, GABA y agonistas inducen un flujo de cloruro que es incrementado por benzodiazepinas, barbitúricos, algunos neuroesteroides, etanol y algunos anestésicos, mientras que es reducido por antagonistas competitivos y compuestos que actúan en el sitio de unión de picrotoxina. La profundización del estudio de este último sitio es importante ya que es el sitio de acción de insecticidas/plaguicidas ampliamente utilizados del tipo de los organoclorados (lindano, endosulfano, dieldrina, etc.) (Vale et al., Neuroscience, 2003, 17:397 y refs.). Compuestos convulsivantes, como el γ-hexaclorociclohexano, disminuyen el incremento de unión de [3H]flunitrazepam inducida por GABA al interactuar directamente con el sitio de reconocimiento para la picrotoxinina, comportándose así como un antagonista no competitivo del receptor GABAA (Vale et al., Eur J Pharmacol, 1997, 319:343). Considerando la bioactividad conferida a la tujona como un potente agente convulsivante (Weisbord et al., N Engl J Med, 1997, 337:825), debido a su efecto como antagonista del receptor GABAA, en donde se comporta como un bloqueante del canal de cloruro (Hold et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2000, 97:3826), es que en el presente trabajo se evaluó el comportamiento de dos cetonas cíclicas, similares estructuralmente a este último compuesto, sobre la estimulación de la unión de [3H]flunitrazepam inducida por GABA. Dado que diferentes comportamientos neurofarmacológicos han sido descriptos para un mismo compuesto dependiendo de su estereoisomería, mostrando diferencias en su estéreo-especificidad en cuanto a su capacidad de acción, potencia y afinidad de unión al receptor GABAA, las cetonas utilizadas fueron los dos enantiómeros de carvona ((+) Carvona y (?) Carvona). Los ensayos fueron realizados en sistemas de cultivos primarios de neuronas corticales de embriones de rata Wistar (16-18 días de gestación) por lo que se evaluó también la eventual citotoxicidad de los compuestos estudiados. La viabilidad celular fue determinada a través del ensayo de MTT, que indica la integridad mitocondrial de la célula (García et al., Neuropharmacol, 2006, 50:25). Los resultados mostraron que el agonista GABA, a concentraciones entre 2 y 200 µM, fue capaz de estimular la unión del radioligando de manera dosis dependiente en el sistema de estudio, tal como era esperable. La tuyona disminuyó considerablemente el aumento de la unión del radioligando inducida por GABA. Asimismo, ambos estereoisómeros de carvona ((+) y (-)), se comportaron de manera similar, reduciendo el estímulo inducido por GABA. Ninguno de los enantiómeros produjo una disminución significativa en la viabilidad celular a concentraciones hasta 2 mM durante 30 min o 24 hs de exposición a los mismos. Considerando el mecanismo de acción de la tuyona, como antagonista de GABA y bloqueante del canal de Cl-, y teniendo en cuenta los resultados obtenidos arriba mencionados, podemos sugerir que (+) y (-) carvona podrían comportarse de la misma manera y reconocer también el sitio de la picrotoxina en el receptor. Esta conclusión sugeriría que, a pesar de no mostrar neurotoxicidad a las concentraciones ensayadas, ambos compuestos se podrían comportar como eventuales agentes convulsivantes sobre el organismo. De todas maneras, esta hipótesis debería ser confirmada mediante el uso de radioligandos específicos para el sitio de picrotoxina, ensayos que se planean llevar a cabo próximamente en nuestro laboratorio.   Agradecimientos: este trabajo fue financiado por CONICET, FONCyT y SECyT-UNC.