INVESTIGADORES
SANCHEZ mariela Eugenia
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación del efecto de (+) Carvona y (-) Carvona sobre el receptor GABAA, en cultivos primarios neuronales
Autor/es:
SANCHEZ M.E.; GARCÍA D.A.
Lugar:
Casilda, Santa Fé
Reunión:
Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
El receptor GABAA constituye el principal
receptor inhibitorio del Sistema Nervioso Central y es el destino
específico de barbitúricos, neuroesteroides, etanol, anestésicos, Zn+
así como de agentes neurotóxicos y convulsivantes como la picrotoxinina. Los
diferentes lugares de reconocimiento no son independientes entre sí, sino que
la ocupación de cualquiera de ellos produce modificaciones alostéricas en los
otros sitios (Macdonald et al., Annu Rev Neurosci, 1994, 17:569;
Whiting, Neurochem Int, 1999, 34:387). En general, GABA y agonistas
inducen un flujo de cloruro que es incrementado por benzodiazepinas,
barbitúricos, algunos neuroesteroides, etanol y algunos anestésicos, mientras
que es reducido por antagonistas competitivos y compuestos que actúan en el
sitio de unión de picrotoxina. La profundización del estudio de este último
sitio es importante ya que es el sitio de acción de insecticidas/plaguicidas
ampliamente utilizados del tipo de los organoclorados (lindano, endosulfano,
dieldrina, etc.) (Vale et al., Neuroscience, 2003, 17:397 y
refs.).
Compuestos convulsivantes, como el
γ-hexaclorociclohexano, disminuyen el incremento de unión de [3H]flunitrazepam
inducida por GABA al interactuar directamente con el sitio de reconocimiento
para la picrotoxinina, comportándose así como un antagonista no competitivo del
receptor GABAA (Vale et al., Eur J Pharmacol,
1997, 319:343).
Considerando la bioactividad conferida a la tujona
como un potente agente convulsivante (Weisbord et al., N Engl J Med, 1997, 337:825),
debido a su efecto como antagonista del receptor GABAA, en donde se
comporta como un bloqueante del canal de cloruro (Hold et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2000, 97:3826), es
que en el presente trabajo se evaluó el comportamiento de dos cetonas cíclicas,
similares estructuralmente a este último compuesto, sobre la estimulación de la
unión de [3H]flunitrazepam inducida por GABA. Dado que diferentes
comportamientos neurofarmacológicos han sido descriptos para un mismo compuesto
dependiendo de su estereoisomería, mostrando diferencias en su
estéreo-especificidad en cuanto a su capacidad de acción, potencia y afinidad
de unión al receptor GABAA, las cetonas utilizadas fueron los dos
enantiómeros de carvona ((+) Carvona y () Carvona).
Los ensayos fueron realizados en sistemas de
cultivos primarios de neuronas corticales de embriones de
rata Wistar (16-18 días de gestación) por lo que se evaluó también la
eventual citotoxicidad de los compuestos estudiados. La viabilidad celular fue determinada a través del ensayo de MTT, que
indica la integridad mitocondrial de la célula (García et al., Neuropharmacol,
2006, 50:25).
Los resultados mostraron que el agonista GABA, a
concentraciones entre 2 y 200 µM, fue capaz de estimular la unión del
radioligando de manera dosis dependiente en el sistema de estudio, tal como era
esperable.
La tuyona disminuyó considerablemente el aumento de
la unión del radioligando inducida por GABA. Asimismo, ambos estereoisómeros de
carvona ((+) y (-)), se comportaron de manera similar, reduciendo el estímulo
inducido por GABA.
Ninguno de los enantiómeros produjo una disminución
significativa en la viabilidad celular a concentraciones hasta 2 mM durante 30
min o 24 hs de exposición a los mismos.
Considerando el mecanismo de acción de la tuyona, como
antagonista de GABA y bloqueante del canal de Cl-, y teniendo en
cuenta los resultados obtenidos arriba mencionados, podemos sugerir que (+) y
(-) carvona podrían comportarse de la misma manera y reconocer también el sitio
de la picrotoxina en el receptor. Esta conclusión sugeriría que, a pesar de no mostrar
neurotoxicidad a las concentraciones ensayadas, ambos compuestos se podrían
comportar como eventuales agentes convulsivantes sobre el organismo. De todas
maneras, esta hipótesis debería ser confirmada mediante el uso de radioligandos
específicos para el sitio de picrotoxina, ensayos que se planean llevar a cabo
próximamente en nuestro laboratorio.
Agradecimientos: este trabajo
fue financiado por CONICET, FONCyT y SECyT-UNC.