INVESTIGADORES
FRANCHINI Gisela Raquel
congresos y reuniones científicas
Título:
Rol de la región alfa-helicoidal en FABPs de intestino: Construcción de proteínas quiméricas alfa-I.
Autor/es:
GISELA R. FRANCHINI, BETINA CORSICO, HORACIO A. GARDA Y JUDITH STORCH.
Lugar:
INIBIOLP. Fac. Cs. Médicas. UNLP. Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Jornada; Segundas Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas.; 2003
Resumen:
Las células del epitelio intestinal coexpresan dos miembros de la familia de proteínas que unen ácidos grasos (FABP), dichas proteínas son FABP de intestino (I-FABP) y FABP de hígado (L-FABP).Ambas proteínas, y al igual que el resto de la familia presentan una estructura terciaria altamente conservada, la cual consta de diez cadenas beta antiparalelas, determinando una cavidad hidrofóbica y una región portal conformada por dos alfa hélices (I y II). Trabajos previos han demostrado que I-FABP transfiere el ácido graso de manera colisional,, es decir que existe una interacción física con membranas, mientras que L-FABP lo transfiere de manera difusional. Por otra parte existen fuertes evidencias que demuestran la importancia de la región alfa-helicoidal en la determinación del mecanismo de transferencia de los ácidos grasos hacia membranas. Considerando la presencia en I-FABP de una hélice anfipática , correspondiente a alfa I y su posible interacción con membranas; se han construido un par de proteínas quiméricas intercambiando la región alfa I entre ambas FABP´s de intestino. Para ello se introdujeron sitios de restricción en los cDNA de ambas proteínas mediante mutagénesis sitio-dirigida por PCR de solapamiento. Los fragmentos fueron purificados, intercambiados y ligados. Una vez obtenidos los cDNA quiméricos, fueron subclonados en el vector de expresión pET-11d. Se procedió a la transformación de la cepa E. coli BL21 (DE3). Los resultados muestran una marcada sobreexpresión de ambas proteínas quiméricas. Una de ellas aII-bLFABP, forma cuerpos de inclusión; mientras que aIL-bIFABP sólo lo hace parcialmente. Se ensayaron distintas metodologías con la finalidad de recuperar en forma soluble ambas proteínas quiméricas.
