Análisis enzimático de una lacasa recombinante proveniente del hongo de pudrición blanca Phlebia brevispora BAFC633

MOLINA A; SGROPPO S; MILDE LB; ZAPATA PD; FONSECA MI

Simposio; SAPROBIO 2021 - TRANSFIRIENDO BIOTECNOLOGÍA PARA EL DESARROLLO; 2021

Las lacasas son enzimas de la familia de lasmulti-cobre oxidasas que han suscitado muchointerés debido a su amplia especificidadde sustrato. Las propiedades de las lacasas lashacen buenas candidatas para diversas aplicacionesbiotecnológicas, que van desde laindustria textil hasta la industria de alimentos.Estas enzimas han sido encontradas en hongosaislados en la provincia de Misiones, unode ellos es Phlebia brevispora BAFC633.Nuestro grupo ha logrado expresar conéxito la enzima lacasa proveniente del hongode pudrición blanca Phlebia brevispora-BAFC633en la levadura GRAS Kluyveromyceslactis.El objetivo fue realizar el análisis enzimáticode una lacasa recombinante presenteen el sobrenadante de cultivo de Kluyveromyceslactis. Para lo cual se partió de lascondiciones de cultivo optimizadas parala producción de lacasa previamente. Estaconsitió en medio YPGal (20% extracto levadura,a0% peptona, 20% galactosa), enun volumen final de 20 ml incubado durantecuatro días (día que se obtuvo el pico deactividad) a 28ºC a a50 rpm suplementadocon 0,5 mmol l-a de sulfato de hierro. Éste secentrifugó durante a0 minutos a 6000 g y elsobrenadantese utilizó para las determinaciones.En primera instancia se realizó un zimogramay la actividad se reveló incubando elgel en tampón de acetato de sodio con 5mmol l-a de 2,6 dimetoxifenol. También seevaluó la estabilidad de la enzima frente adiferentes condiciones de pH (en un rago de3 a 6,5) y temperatura (en un rango de 20 a90°C), para ello, fue sometida a cambios depH y temperatura a distintos tiempos durante5 h y se midió la actividad en un espectrofotómetroa 469 nm con 5 mmol l-a de 2,6dimetoxifenol como sustrato.El zimograma permitó visualizar la actividadde la enzima recombinante. El valor depH óptimo para la actividad de la enzima fuede 3,6, y la temperatura óptima fue de 40ºC.La lacasa recombinante fue más estable auna temperatura de 40ºC manteniendo a00% de actividad por a h, mientras que a las 2 h conservó un 85% de su actividad, peroal cabo de 5 h, retuvo sólo el 5% de la actividad.Al aumentar la temperatura de incubación,la actividad enzimática fue disminuyendo.La enzima mostró mayor estabilidada pH 3,6 manteniendo el 80% de la actividaddespués de 2 h de incubación, disminuyendosu actividad a a0% después de 5 h.El análisis de las características bioquímicasde la enzima lacasa, posibilitará unaaplicación biotecnológica regional y sustentable.De esta manera, éstos resultadossentarán las bases para futuras investigacionesde la proteína como así también para suaplicación en diferentes procesos.