IDENTIFICACIÓN DE UNA CEPA FÚNGICA DEL GÉNERO PENICILLIUM NATIVA DE LA PROVINCIA DE MISIONES PRODUCTORA DE ACTIVIDAD LIPASA.

ORTELLADO, LAURA ESTER ; LISOWIEC, LEANDRO ANTONIO ; FONSECA, MARIA ISABEL ; ZAPATA, PEDRO DARÍO

Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología General (XIV SAMIGE); 2019

Introducción y Objetivos: Los daños que ocasionan los lípidos y carbohidratos generados por la industriaalimentaria al medio ambiente son ampliamente conocidos. Las lipasas son enzimas capaces de modificar losaceites a través de la reacción de hidrólisis; rompiendo el enlace éster del triglicérido en presencia de aguaproduciendo glicerol y ácidos grasos. La aplicación de enzimas puede llegar a resolver los problemas en losprocesos de tratamiento biológico de aguas residuales con un alto contenido de grasa y sólidos en suspensión.Los hongos presentan una amplia capacidad degradativa produciendo lipasas como parte de su metabolismo.Estudios previos de este grupo de trabajo han logrado evidenciar que la cepa LBM081 presenta un granpotencial lipolítico por lo cual su identificación a nivel específico se vuelve crucial, en vistas a potencialesaplicaciones en biotecnología. Es por ello que el objetivo de este trabajo fue identificar la cepa fúngica delgénero Penicillium LBM081 nativa de la Provincia de Misiones empleando diferentes marcadores molecularespara ello.Materiales y Métodos: La cepa que se utilizó de Penicillium sp. está disponible en el cepario del Laboratoriode Biotecnología Molecular (Instituto de Biotecnología Misiones). Para la identificación de la cepa seleccionada,se realizó una extracción de ADN a partir de micelio obtenido de cultivos de 7 días en medio líquido YES(Extracto de levadura 5 g/L; Glucosa 30 g/L) utilizando el protocolo propuesto por Fonseca et al (2013). Lacalidad del ADN se verificó mediante la visualización en geles de agarosa 1 % (p/v) teñidos con gel red. Para laidentificación de la cepa se utilizaron los cebadores ITS1-ITS4, Bt2a-Bt2b y RPB2-5-RPB2-7R. Se realizó unaPCR a partir de 60ng de ADN como molde. Una reacción sin el agregado de ADN se utilizó como controlnegativo. Los productos de las PCR se corrieron en un gel de agarosa 2% y se tiñó con gel red. Los productosse secuenciaron y se emplearon para realizar una búsqueda de secuencias homólogas del reino Fungi medianteel programa BLASTN. Se recuperaron las primeras 100 secuencias de especies tipo relacionadas y de eseconjunto de secuencias se eliminaron las secuencias redundantes. Para realizar el alineamiento se tomaron lasprimeras 43 secuencias y se llevó a cabo el alineamiento con el programa MUSCLE. Resultados: El dendrograma concatenado se llevó a cabo mediante el programa MEGA 6.0 a partir desecuencias de ITS; BenA y RPB-2 utilizando el método de NEIGHBOR JOINING (NJ) con un boostrap de 1000repeticiones. Se corroboró la pertenencia al género Penicillium de los aislamientos LBM081 al observar a nivelmacro y microscópico la presencia de conidios, metúlas y fiálides. Las estructuras observadas micro ymacroscópicas fueron las estructuras típicas del género Penicillium. Del análisis bioinformático de las secuenciasobtenidas y la construcción de un árbol concatenado se obtuvo que el aislamiento LBM 081 se agrupó en unclado con P. rubens con un 96% de identidad.Conclusiones: Los resultados indican que el aislamiento LBM 081 se corresponde con P. rubens.