Estudio de factores de virulencia: fosfolipasas, proteinasas y producción de biopeliculas en cepas Candida parapsilosis S.L. provenientes de muestras clínicas.

SEÑUK, IA.;; ASKENAZI, V;; IRRAZABAL, LA.;; VERA, M; ; FONSECA, MI.; VEDOYA, MC

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Candida parapsilosis S.L. son hongos oportunistas que constituyen la flora habitual del ser humano. Las cuales son reportadas como responsables de infecciones sistémicas severas en pacientes inmunocomprometidos o aquellos sometidos a procedimientos médicos invasivos y/o tratamientos terapéuticos. La virulencia de este género incluye la adhesión, el desarrollo hifal, diversidad fenotípica, la formación de biopelículas y la producción de enzimas hidrolíticas extracelulares, tales como fosfolipasas, lipasas y proteinasas.El objetivo del presente trabajo fue investigar la actividad de exoenzimas (fosfolipasas y proteínasas) y la producción de biofilm in vitro de 17 cepas de Candida parapsilosis S.L., aisladas de muestras clínicas.Para comprobar la producción extracelular de proteinasa se hicieron crecer las cepas en un medio enrriquecido con 1,17% de YCB (Difco),0,2% de albúmina sérica bovina Fracción V y 1,5% de agar noble, a pH 4 y se incubarón durante 10 días a 37ºC.La determinacion de la producción extracelular de fosfolipasa, se realizó tras el desarrollo las levaduras en un medio SDA con NaCl 1M, CaCl2 0,005M y 8% de yema de huevo, y se incubó durante 48 hs a 37°C. La producción de ambas enzimas se evaluó verificando el halo de inhibición de precipitacion alrededor de las colonias.La demostración de la capacidad de formación de biofilms se realizó luego de la incubación de las levaduras en SDA durante 24 h a 37ºC, tras la preparación de una suspensión de cada levadura de 3x107UFC/ml en caldo SD suplementado con glucosa, 1ml de la suspensión se inoculó en tubos de poliestireno conteniendo 9 ml de caldo SD, se distribuyó 200µl de esta suspensión en cada pocillo de una placa de microtitulación, incubándose a 37º C durante 24 h. Luego la placa se lavó 4 veces con buffer PBS y se coloreó con safranina al 1%. La lectura se realizó en espectrofotómetro a 490 nm. La disminución del porcentaje de transmitancia es proporcional al grado de formación de biofilm. Todos los ensayos se realizaron por triplicado.De las 17 cepas de Candida parapsilosis S.L., 5 cepas produjeron biopelículas, fosfolipasas y proteinasas, 4 exhibieron solamente biopelículas, 2 manifestaron biopelículas y fosfolipasas, 2 exteriorizaron únicamente fosfolipasas, 1 cepa reveló biopelículas y proteinasas y 3 cepas no expresaron estos factores de patogenicidad.La información experimental obtenida de estos factores de virulencia permite inferir que se expresan de manera diferente y no necesariamente se manifiestan a la vez.