Adhesión in vitro de levaduras del complejo Candida parapsilosis.

VERA, MB.;; SEÑEK, IA.;; ASKENAZI, MV.;; IRRAZABAL, L; ; SOSA, VME.; ; FONSECA, MI.; ; VEDOYA, MC.

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Candida parapsilosis sensu lato (s.l.) es un complejo de hongos levaduriformes que abarca las especies C. parapsilosis sensu stricto (s.st.), C. metapsilosis y C. orthopsilosis. Su investigación es relevante ya que se ha observado un incremento en el número de aislamientos de estos patógenos oportunistas, a partir de un amplio espectro de muestras clínicas. La adhesión es un mecanismo de virulencia que faculta a los microorganismos para colonizar y adaptarse en un nuevo nicho.Con el objetivo de determinar la capacidad de adhesión de C. parapsilosis s.l. a células epiteliales, se reactivaron 15 cepas en agar Sabouraud a 37ºC, por triplicado. A las 24h, se sembró en 10mL de caldo Sabouraud, y se cultivó en agitación constante durante 48h a 37ºC. El cultivo se centrifugó para concentrar la cepa fúngica, y seguidamente se lavó con Buffer fosfato salino (PBS) dos veces, finalmente, se resuspendió en PBS hasta obtener una concentración de 2.5x107 cél/mL. Se realizó un hisopado bucal a dadores sanos para obtener células epiteliales de la mucosa yugal, se suspendió en PBS, y se realizó el mismo proceso de lavado que para las levaduras; la suspensión final tuvo una concentración aproximada de 5x106 cél/mL. Se cultivaron 500L de la suspensión de levaduras con 500L de la suspensión de células epiteliales, equivalente a una relación 50:1 -levaduras: célula - en agitación constante durante 60min a 37ºC. Los cultivos fueron filtrados con papel de filtro Whatman Nº2 y posteriormente las células fueron fijadas sobre un portaobjeto con metanol. Se realizó una tinción de Gram. Se realizó el conteo en microscopio de 100 células epiteliales (por cada muestra) con la correspondiente cantidad de levaduras adheridas.Cepas provenientes de hemocultivo presentaron adhesión de entre 3.81-10.06%; cepas provenientes de uña de mano entre 3.29-10.11%; una cepa aislada de urocultivo tuvo un porcentaje de adherencia de 7.22%; y finalmente, cepas cuya muestra de origen es desconocida, un porcentaje entre 2.98-5.84%.La caracterización de cepas involucradas en procesos infecciosos de diferente índole, encierra la posibilidad de aportar nuevos datos que contribuyan a esclarecer los mecanismos de patogenicidad. Se precisa continuar con las investigaciones de dichos mecanismos, puesto que la adhesión solo engloba el primer paso en lo que respecta a la colonización y los procesos a posteriori.