Identificación de basidiomicetes productores de enzimas ligninolíticas

SCHWEIZER YD; ; SAWOSTJANIK AFANASIUK SS; ; GIORGIO EM; ; FONSECA MI;; ZAPATA PD

Taller; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Misiones es una de las provincias que presenta una alta biodiversidad, debido a su clima subtropical, favoreciendo el desarrollo de una extensa variedad de especies fúngicas. Muchas especies están siendo estudiadas para su aplicación biotecnológica, principalmente las que generan descomposición de la madera y presentan actividad ligninolítica. Para la utilización de estas especies en procesos biotecnológicos se requiere primeramente el aislamiento e identificación de las mismas. El objetivo principal de este trabajo consistió en identificar morfológica y molecularmente hongos degradadores de madera aislados en la selva misionera. La identificación se realizó por dos vías. En primer lugar la identificación morfológica por medio de taxonomía clásica, utilizando claves taxonómicas, teniendo en cuenta caracteres macro-micro morfológicos de basidioma fresco. Y en segundo lugar, por medio de técnicas moleculares, utilizando marcadores genéticos como los espaciadores internos transcritos (ITS) y la subunidad grande (LSU), del ADN ribosomal (rADN). Para la identificación morfológica se utilizaron las claves de Gorjón, Robledo, Urcelay, Wright y Deschamps. Los principales caracteres taxonómicos fueron forma y color del píleo, tipo de himenio, tipo de las hifas, presencia de estípite. Para la identificación molecular, primeramente se realizó extracción de ADN genómico siguiendo el protocolo propuesto por Winning y Langridge (1991), luego por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y utilizando una combinación de cebadores universales (ITS1 y NL4), se amplificaron las regiones de interés. Los productos obtenidos por PCR fueron secuenciados por MACROGEN. Utilizando las secuencias obtenidas se procedió a su alineamiento con secuencias disponibles en las bases de datos del NCBI, Fungal Barcoding y Mycobank, utilizando la herramienta BLAST. La identificación molecular se realizó por medio de un análisis filogenético. Para ello se construyeron árboles filogenéticos mediante el método de Máxima Parsimonia con el programa Mega 6 y se realizó un análisis de Bootstrap con 1000 réplicas que se llevó a cabo para evaluar la solidez de la topología del árbol obtenido.Con los caracteres morfológicos micro y macroscópicos se logró identificar a los dos hongos seleccionados, como pertenecientes a los géneros Favolus y Schizophyllum. En base al análisis filogenético, se identificaron a estos hongos como pertenecientes a, Favolus sp. y Schyzophyllum commune. Siguiendo las dos metodologías de identificación, se lograron obtener concordancia en las identificaciones. Los resultados obtenidos, sientan las bases para continuar con la caracterización en profundidad de los hongos identificados y seguir evaluando hongos aislados de la región con potencial aplicación biotecnológica, en respuesta a problemáticas locales y teniendo en cuenta que cada cepa microbiana esta mejor adaptada a su habitad.