Selección e identificación de bacterias con actividad lipasa

QUIROGA ZINGARETTI, AE.;; FONSECA, MI.; KELLER, N;; ZAPATA, PD.,; QUIROGA M

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Las lipasas son parte de la familia de las hidrolasas que catalizan la hidrólisis de una amplia variedad de sustratos naturales con una alta especificidad. El objetivo del trabajo fue seleccionar e identificar bacterias nativas de la provincia de Misiones con actividad lipasa. Las cepas pertenecen a la colección de la Cátedra de Bacteriología, FCEQyN-UNaM.Ciento cincuenta cepas se recuperaron en agar Columbia por el método de aislamiento a 30°C por 24 h, para corroborar pureza y viabilidad. Para la detección cualitativa de la actividad lipasa, se ensayaron 3 métodos descriptos en la literatura, los cuales se modificaron con la finalidad de poder compararlos. Estos métodos fueron los propuestos por: Sierra (1957), Cardenas et al (2001) y Kouker y Jaeger (1987) suplementados con Tween 80, tributirina y aceite de oliva como sustrato, respectivamente. De los cultivos over night, se realizaron suspensiones correspondientes a las escala 3 McFarland (DO600). La siembra se realizó con un multiinoculador. Los extractos libres de células se obtuvieron según metodología propuesta por Mobarak-Qamsari (2011), con aceite de oliva como sustrato. La actividad enzimática se determinó espectrofotométricamente (410 nm) midiendo el p-nitrofenol producido por la hidrólisis del palmitato del p-nitrofenol. La identificación de las cepas con actividad cuantitativa se realizó por MALDI-TOF.Con el método de Sierra se detectó actividad lipolítica en 143 aislamientos, mientras que con el método de Cardenas se observó en 96 cepas y con el método de Koukler en 54 cepas. Cincuenta y tres cepas mostraron actividad lipolítica en los 3 métodos cualitativos por lo cual se seleccionaron para determinar cuantitativamente la actividad enzimática.De entre estas, 10 cepas identificadas como Pseudomonas spp., y Burklordelia spp. presentaron actividad lipolítica con un máximo de 3322,67 UI/mL (p