Empleo de rodamina B para la determinación de lipasas en aislamientos fúngicos del género Penicillium nativos de Misiones

ORTELLADO, LE; FONSECA, MARÍA I; ; VILLALBA, LAURA L; ; ZAPATA, PEDRO D

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

La grasa y las proteínas presentes en las aguas residuales ricas en lípidos generalmente poseen baja biodegradabilidad, causando la generación de olores desagradables, espuma, que dañan la operación y eficiencia de los procesos biológicos. El uso de enzimas hidrolíticas puede ser de gran interés para resolver los problemas en los procesos de tratamiento biológico de aguas residuales con alto contenido de grasas en suspensión.En este sentido las lipasas (E.C. 3.1.1.3) son parte de la familia de las hidrolasas, catalizan la hidrólisis de triacilglicéridos en la interfase lípido-agua a diacilglicéridos y monoacilglicéridos. Los hongos del género Penicillium son buenos productores de enzimas extracelulares tales como, proteasas, celulasas y lipasas, por lo cual son utilizados en el presente estudio.El empleo de rodamina B para la selección rápida de productores de enzima lipasa es un método poco difundido y sin embargo su precisión y sencillez ofrecen buenos resultados.Teniendo en cuenta lo anteriormente expuesto; el objetivo del presente trabajo fue realizar una selección rápida y sencilla de aislamientos del género Penicillium secretores de la enzima lipasa y una posterior verificación cuantificando su actividad.Fueron utilizadas 20 cepas de Penicillium sp. nativas de Misiones disponibles en el cepario del Laboratorio de Biotecnología Molecular (InBioMis).En primera instancia se llevó a cabo un screening primario utilizando medio sólido en placas de Petri suplementado con Rodamina B 0,001% como sustrato.Seguidamente para la selección de los mejores aislamientos productores de actividad lipasa extracelular se calculó el índice de actividad lipasa (IAL). Los aislamientos con índices próximos a 0 correspondieron a los niveles máximos de actividad y fueron seleccionados para continuar con el screening en medio líquido.Con estos aislamientos se procedió al screening en medio líquido conteniendo peptona 0,5 g/ml, extracto de levadura 0,3 g/ml, extracto de carne 0,3 g/ml, aceite de oliva 2 g/ml en condiciones de agitación (130 rpm) a 30°C durante 6 días.La actividad lipolítica fue determinada mediante el método del p-nitrofenol, en espectrofotométro a 405 nm. Una unidad (U) de actividad enzimática se definió como la cantidad de enzima que libera 1 μmol de p-nitrofenol por minuto.Primeramente en los ensayos cualitativos se evaluó la actividad lipasa de 20 aislamientos de Penicillium sp por duplicado. Para ello se utilizó la técnica con Rodamina B, descripta anteriormente, la observación de halos de fluorescencia bajo luz UV 350 nm evidenció la actividad de enzimas lipasas.Para la selección de los mejores aislamientos productores de actividad lipasa extracelular se calculó el índice de actividad lipasa (IAL) el cual toma valores entre 0 y 1. Los índices que fueron más próximos a 0 correspondieron a los niveles máximos fueron los seleccionados para continuar con el screening en medio líquido.Los aislamientos seleccionados fueron: P16; P6; P25; P10; P18; P5; P7 los cuales evidenciaron actividad lipasa a través de la formación de un halo≥ 30 mm, mientras que en los restantes aislamientos empleados no se evidenció actividad lipasa.Posteriormente la realización de los medios líquidos y cuantificación enzimática permitió corroborar los resultados obtenidos a través de los ensayos cualitativos. Logrando la selección de 7 aislamientos con buena producción de la enzima lipasa.