Detección de actividad fibrinolítica en hongos nativos de Misiones

ACOSTA, GA; ; FONSECA MI; ; FARIÑA, JI; ; ZAPATA PD

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Debido a un mal funcionamiento o al desbalance entre el sistema fibrinolítico natural plasminógeno/plasmina y el sistema de coagulación, pueden observarse dificultades para disolver trombos sanguíneos, dejando así, grandes residuos insolubles. Estos, ya sea que se encuentren circulando en la sangre o adheridos a las paredes endoteliales, pueden causar ataques al corazón y otras enfermedades cardiovasculares, las que representan una de las principales causas de muerte en todo el mundo. Muchos de los productos utilizados en la terapia trombolítica clínica presentan desventajas tales como baja especificidad sobre fibrina y costos relativamente altos. Por lo expuesto, existe un creciente interés en la obtención de proteasas fibrinolíticas a costo reducido y con características terapéuticas apropiadas, lo que ha llevado a la búsqueda de nuevas fuentes de obtención, siendo de gran importancia aquellas producidas por microorganismos. En este sentido, los Agaricomicetes son buenos productores de enzimas proteolíticas extracelulares, lo que podría incluir a la actividad fibrinolítica, otorgando así la ventaja adicional de la separación mediante filtración simple.El objetivo de este trabajo fue seleccionar cepas de Agaricomicetes nativos de la provincia de Misiones capaces de secretar enzimas proteolíticas con actividad fibrinolítica. Para ello, se realizó un screening con el fin de determinar la actividad proteolítica y fibrinolítica de 35 cepas de Agaricomicetes nativos de Misiones, perteneciente a la colección de cultivo del Laboratorio de Biotecnología Molecular (InBioMis-UNaM). Los hongos se activaron en medio sólido conteniendo (en g/L): extracto de malta, 12,7 y agar, 17, durante 5 días a 28ºC. A partir de las placas activas se cortó un taco de 7 mm cubierto de micelio joven de cada cepa y se inocularon en 20 mL de medio líquido conteniendo (en g/L): glucosa, 35; peptona de soja, 5; extracto de carne, 5; NaCl, 2; KH2PO4, 0,5 y MgSO4¬·7H2O, 0,5, los que fueron incubados 7 días a 28ºC. El sobrenadante de cultivo se separó del micelio por centrifugación a 6.000 x g durante 10 min. La actividad proteolítica se determinó en placas de Agar-Leche descremada (1% p/v). En cada placa se realizaron pocillos de 5 mm con sacabocado estéril, en los cuales se colocaron 10 µL de sobrenadante y se incubó a 37ºC por 24 h. La actividad proteolítica se determinó por la presencia de halos de degradación. La actividad fibrinolítica se reveló mediante el método de placa de fibrina de Astrup & Mullertz, 1952.De las 35 cepas analizadas, 12 revelaron actividad proteolítica y 2 además presentaron actividad fibrinolítica. Ambas cepas, pertenecientes al género Schyzophyllum, fueron seleccionadas con el fin de optimizar la producción enzimática a escala laboratorio, para evaluar su potencial aplicación como agentes trombolíticos.