Identificación de las proteínas secretadas por Trametes villosa LBM 033 (Misiones, Argentina) en condiciones controladas de cultivo

CONIGLIO RO; FONSECA MI; DIAZ GV; CAMPOR E; ONTAÑON O; GHIO S; ZAPATA, PD

Jornada; Jornadas Cientifico - Tecnologicas en el marco del 45° aniversario de la UNaM.; 2018

Las prácticas agrícolas generan desperdicios lignocelulósicos compuestos por celulosa, hemicelulosas y lignina que pueden ser bioconvertidos en productos de valor agregado como los biocombustibles. La conversión de esta biomasa a bioetanol requiere de su completa degradación, la cual puede llevarse a cabo de forma sustentable a través de la utilización de enzimas lignocelulolíticas, cuya producción en la naturaleza está a cargo principalmente de hongos y, a su vez, fuertemente regulada por las fuentes de carbono y nitrógeno disponibles en el medio.El objetivo de este trabajo fue caracterizar el secretoma de T. villosa LBM 033 (Misiones, Argentina) en presencia de celulosa, sulfato de amonio y peptona.Para ello, T. villosa LBM 033 fue cultivado en medio líquido Czapek suplementado con celulosa microcristalina 15 g/l, peptona 3 g/l y sulfato de amonio 3g/l a 28 ± 2°C y 100 rpm durante 12 días. Transcurrido este tiempo, el medio fue filtrado, centrifugado y las proteínas fueron precipitadas con ácido tricloroacético durante toda la noche a 4°C. Luego, el sobrenadante se centrifugó y se realizaron lavados con acetona y etanol. El pellet así obtenido se resuspendió en 500 μl de agua para HPLC y se redujo con ditiotreitol 10 mM, se alquiló con iodacetamida 20 mM y se precipitó con ácido tricloroacético 100 %. Para identificar las proteínas secretadas en estas condiciones, se realizó un análisis del secretoma de T. villosa LBM 033 mediante la metodología nano LS MS/MS y el programa Proteome Discoverer utilizando el genoma de T. versicolor como genoma de referencia (Cequibiem, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA, Argentina).Se lograron identificar y caracterizar 9 proteínas con una confianza alta (≤ dos péptidos únicos) de las cuales 6 estuvieron relacionadas con la bioconversión de la biomasa lignocelulósica. La principal proteína identificada fue una celobiohidrolasa de tipo II; además, se lograron identificar cuatro peroxidasas y una celobiosa-deshidrogenasa. En este sentido, un cóctel que contenga enzimas hidrolíticas y oxidativas es favorable desde el punto de vista de la aplicación biotecnológica. Es por ello, que estos resultados indican que T. villosa LBM 033 puede constituir una valiosa fuente de enzimas ligninolíticas para aplicarse en la conversión completa de biomasa lignocelulósica a bioetanol.