Identificación y caracterización de un gen que codifica para lacasa del hongo Phlebia brevispora

MOLINA A; WINNIK D; BUSI MV; FARIÑA JI; VILLALBA LL; ZAPATA PD; FONSECA MI

Mendoza

Congreso; XXXVI J. Arg. Bot. - XXVIII Reunión Anual Soc. Bot. Chile - Micología; 2017

Las lacasas pertenecen a la familia proteica de las multicobre oxidasas. Estas enzimashan sido encontradas en hongos como Phlebia brevispora. Las lacasas pueden seraplicadas en la deslignificación de la pulpa de papel (¿), detoxificación de químicosrecalcitrantes, degradación de compuestos policíclicos aromáticos, biorremediación desuelos y aguas contaminadas. El objetivo del presente trabajo fue identificar y clonar un gen que codificacodificantede una para lacasa del hongo P. brevispora. Para ello se extrajo ADN genómico (¿) y se amplificó por PCR las regionesón I y IV deunión al cobre y las regiones 5 y 3´se obtuvieron por PCR inversa. Todos losfragmentos obtenidos se clonaron en pGEMT utilizando Escherichia coli comohospedero; , las colonias blancas positivas (por resistencia a antibiótico y coloración alX-Gal) fueron seleccionadas y los plásmidos se obtuvieron por lisis alcalina para susecuenciación. Se identificó una Una secuencia de 2748 pb correspondiente perteneciente a unalacasa fue identificada(mediante análisis de homología de secuencias) y caracterizada.La misma incluye , incluyendo 13 exones y 12 intrones, el cualy genera una proteínamadura de 521 aminoácidos con un péptido señal de 20 aminoácidos y ocho posiblessitios de glicosilación. Elementos reguladores propios de eucariotas como cajas TATA,cajas CAAT y cajas CAAT invertidas fueron encontrados, así como sitios de regulacióna cobre (ACE), metales (MRE), antioxidante (ARE), nitrógeno (NIT) y calor (HSE). Estos resultados pueden ayudar a optimizar la fermentación para la producción delacasa fúngicas, y también abrir nuevas fronteras para la ingeniería de promotoresfuertes para la producción