Identificación fenotipica y puesta a punto de una tecnica molecular para la caracterización del complejo Candida parapsilosis.

VEDOYA C; SOSA V; CHADE C; MERELES RODRIGUEZ M; VELAZQUE E; FONSECA MI

Congreso; XXIII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGÍA. XIV CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGIA. IV CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGIA DE MEDICAMENTOS ? CLAMME. REUNIÓN DE LA SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE TUBERCULOSIS Y OTRAS MICOBACTERIOSIS (SLAMTB); 2016

Dentro de los hongos oportunistas se encuentran las levaduras del género Candidas que producen candidiasis, dentro de estas micosis; lascandidiasis sistémicas representan un gran problema en pacientes inmunodeprimidos, internados y neonatos. Uno de los agentes que haemergido como principal agente causal de candidiasis invasoras, es Candida parapsilosis. Esta levadura forma parte de la flora habitual en la pielde ser humano y puede ser trasmitida a través de las manos. Candida parapsilosis en un complejo de tres especies genéticamente diferentesdenominadas C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis y C. metapsilosis, las cuales también son diferentes en cuanto a su virulencia ysensibilidad antifúngica. En este sentido es muy importante clasificar a estos agentes en género y especie, siendo fundamental para ello tanto laidentificación fenotípica clásica; como así también la genotípica lo que implica recurrir a técnicas de biología molecular. La región espaciadoratranscripta interna (ITS) del ADNr tiene una larga historia de uso como marcador molecular para la identificación a nivel de especie en losestudios ecológicos y taxonómicos de hongos.El objetivo de este trabajo fue caracterizar al complejo C. parapsilosis fenotípicamente y optimizar las técnicas de biología molecular necesariaspara posteriormente realizar la identificación molecular en las subespecies del complejo.Esto se llevó a cabo a través de identificación de 20 aislamientos del cepario de la Cátedra de Micología de la Facultad de Ciencias ExactasQuímicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones, con métodos micológicos clásicos, como ser, macromorfología en Agar GlucosadoSabouraud, Agar Hongos y Levaduras y en medio cromogénico, CROMagar Candida, y micromorfología en Agar Leche al 1%. Se observaroncolonias blanquecinas, cremosas en todos los medios y en la observación microscópica se observaron levaduras redondas y ovaladas de 4‐5 μmcon pseudomicelio corto. Para la extracción del material genético se utilizó un protocolo para hongos miceliales lográndose obtener ADN encalidad y cantidad suficientes para ser utilizado posteriormente. Asimismo fue posible estandarizar las condiciones para la amplificación por PCRde la región ITS1‐5,8S‐ITS2, siendo necesario utilizar 2,5 mM de Cl2Mg 10ng/μL de ADN templado con una temperatura de hibridación de 58⁰C.Se logró la identificación fenotípica presuntiva y la estandarización de un método fácil, rápido y de relativamente bajo costo, para lograr unaposterior identificación molecular del complejo, y las especies que lo componen y así tener una herramienta para contribuir al diagnósticopreciso para un correcto abordaje terapéutico.