BUSQUEDA DE CEPAS BACTERIANAS NATIVAS PRODUCTORAS DE LIPASAS CON POSIBLE APLICACIÓN BIOTECNOLOGICA

QUIROGA ZINGARETTI, ADRIANA E.; FONSECA, MARÍA I.; QUIROGA, MARINA I.

Jornada; IX Jornadas Cientifico - Tecnologicas FCEQyN-UNaM; 2015

Las lipasas son parte de la familia de las hidrolasas que catalizan la hidrólisis de unaamplia variedad de sustratos naturales con una alta especificidad. Entre estas, lasproducidas por bacterias, constituyen uno de los grupos más importantes de biocatálisis yde interés industrial por su variedad de actividades catalíticas, la capacidad de sermanipuladas genéticamente, su estabilidad, su alta capacidad de hidrólisis, menor costo deproducción y la mayor velocidad de desarrollo de los cultivos.Con el objetivo de identificar bacterias nativas de la provincia de Misionesproductoras de enzimas microbianas con interés biotecnológico (lipasas) se estudiaron 365cepas de Pseudomonas spp, Aeromonas spp. y otros bacilos gramnegativos, que formanparte de la colección de la Cátedra de Bacteriología.Para la detección cualitativa de la producción de lipasas, se ensayaron 8 métodosdescriptos en la literatura utilizando cepas patrones. De entre ellos, se seleccionaron 2para continuar el estudio. El método de Sierra modificado que utiliza Tween 80 comosustrato fue utilizado para un primer screening. Aquellas cepas que hidrolizaban el Tween80 con halos ≥ 30 mm fueron sometidas a un segundo screening con el método de Koukerque utiliza aceite de oliva como sustrato y Rodamina B, lo que permite evidenciar lahidrólisis del sustrato por la aparición de halos fluorescentes alrededor de las colonias alser expuestas a luz UV (350 nm). La obtención de los extractos libres de células se realizósegún metodología propuesta por Mobarak-Qamsari, que utiliza como sustrato aceite deoliva. La actividad enzimática se determinó espectrofotométricamente (410 nm) midiendoel p-nitrofenol producido por la hidrólisis del palmitato de p-nitrofenol. Para investigar, elefecto de la fuente de carbono en la producción de lipasas, el aceite de oliva del medio deMobarak-Qamsari se reemplazó por grasa de manteca, grasa de crema, aceites de girasol,de maíz y de canola, y aceite de girasol y lubricante de motocicletas de desecho.Cuarenta y tres (43) cepas mostraron actividad lipolítica en ambos métodos descreening. Veinte (20) de ellas fueron seleccionadas para determinar cuantitativamente laactividad enzimática. Tres (3) de ellas, todas Pseudomonas spp., mostraron la mayoractividad lipolítica: W91 (7,6 U/ml), W57 (5,2 U/ml) y W98 (4,8 U/ml), por lo que fueronseleccionadas para estudiar el efecto de la fuente de carbono sobre la producción delipasas. W91 solo fue capaz de hidrolizar el aceite de maíz, de girasol y el aceite dedesecho de moto. W57 mostró actividad frente a todos los sustratos lipídicos, menos grasade manteca. W 98 presentó actividad frente a todos los sustratos ensayados.Podemos concluir que, el trabajo realizado nos ha permitido poner a punto distintosmétodos cuali y cuantitativos para la búsqueda de bacterias productoras de lipasas.Además, hemos identificado cepas que podrían resultar de interés por su potencialbiotecnológico, lo que a largo plazo permitiría disponer de una lipasa propia, asequibleeconómicamente y eficaz.