EVALUACIÓN DEL POTENCIAL ENZIMÁTICO E IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE CEPAS PERTENECIENTES AL PHYLLUM BASIDIOMICOTA

MARTÍNEZ, CECILIA. N; CASTRILLO MARÍA. L; FONSECA MARÍA. I; ZAPATA, PEDRO. D; VILLALBA LAURA.

Jornada; IX Jornadas Cientifico - Tecnologicas FCEQyN-UNaM; 2015

Las enzimas hidrolíticas producidas por hongos del phyllum Basidiomicota, hoy díahan cobrado gran importancia en diferentes procesos biotecnológicos e industriales. Por locual, el desarrollo de tecnologías que permitan caracterizar nuevas cepas fúngicas capacesde secretar celulasas con rendimiento óptimo, podría aportar soluciones innovadoras. Asímismo identificar a estos organismos es uno de los objetivos principales perseguidos enesta rama científica. En la actualidad la identificación correcta y completa de hongos utilizano solo caracteres morfológicos, sino también herramientas moleculares. Por tanto,nuestro objetivo fue identificar a nivel de especie diferentes cepas del phyllumBasidiomicota y evaluar cualitativamente su potencial enzimático.A partir de 3 cepas (codificadas como A6, A8, P21) se realizaron ensayos cualitativosen placas de Petri conteniendo medio sólido compuesto por Mandels, agar 1,7% (p/v) ycarboximetilcelulosa (CMC) 0,5% (p/v), como única fuente de carbono. Las cepas seincubaron a 28 ± 1ºC durante 5 días. Posteriormente para detectar su potencialenzimático, se utilizó la técnica del colorante azoico rojo Congo al 0,1%. Se agregó a cadaplaca la solución del colorante con agitación suave durante 15 minutos, y se detuvo lareacción con repetidos lavados con agua corriente sobre la superficie de la placa, hastaobservar la formación del halo de degradación. Este halo se forma debido a la ausencia deCMC, que ha sido desdoblado por la acción del complejo de enzimas hidrolíticas de cadacepa.Partiendo del material genético de las cepas, se logró amplificar y secuenciar laregión ITS1-5,8S-ITS2 mediante la utilización de cebadores universales ITS1 e ITS4. Unavez obtenida la región de interés y su secuencia consenso por medio del programaGeneious, se procedió a contrastar la información obtenida con la existente en la base dedatos del NCBI (National Center for Biotechnology Information) utilizando la herramientaBLAST (Basic Local Alignment Search Tool) y la base de datos Fungal barcoding utilizandola herramienta Pairwise sequence alignment. Se seleccionaron aquellas secuencias conmayor porcentaje de similitud y se analizaron por el método estadístico de NeighborJoining utilizando el test de Bootstrap con 1000 replicas y el modelo Tamura-Nei para elcálculo de distancia genética.La evaluación cualitativa del potencial celulolítico permitió observar en las cepas A6 yA8 presencia de secreción enzimática, y en la cepa P21 actividad nula o ausente bajo ellímite de detección del método empleado. Mediante el análisis de identidad y similitud y laconstrucción de clados monofiléticos, fue posible identificar a las cepas A6, A8 y P21 comopertenecientes a la especie Trametes sanguínea.