EFECTO DEL CuSO4 SOBRE LA EXPRESIÓN DEL GEN DE lacasa EN Ganoderma applanatum CEPA B NATIVO DE MISIONES

SAWOSTJANIK AFANASIUK SS; FONSECA MI; ZAPATA PD; VILLALBA LL

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética; 2011

Ganoderma applanatum es un hongo de pudrición blanca de la madera, de interés por la potencial aplicación biotecnológica de sus enzimas ligninolíticas. Una de las enzimas más importantes del complejo es la lacasa. En este sentido hemos demostrado que el cobre aumenta su actividad en G. applanatum, aunque queda por determinarse si la inducción se produce a nivel transcripcional, traduccional, o postraduccional. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto del CuSO4  sobre la expresión del gen de lacasa en Ganoderma applanatum cepa B, nativo de Misiones. Se realizaron cultivos en condiciones óptimas de producción enzimática inoculando un taco de micelio en medio líquido (ME) conteniendo 12,7g/L extracto de malta, 0,5% p/v extracto soluble de maíz, y ME suplementado con 0,2mM de CuSO4; tras 7 días de crecimiento se extrajo ARN total, el cual fue semicuantifi cado y utilizado para realizar RTPCR. La reacción de retrotanscripción se realizó en un volumen de 22µl conteniendo 5µg de ARN, 0,5µg de  cebador Oligo-dT, 5 X Buffer, 2,8mM dNTPs, 20 U de Inhibidor Ribonucleasa y 1 U de Trancriptasa Reversa. La PCR se realizó en un volumen de 20µl conteniendo 1X Buffer, 2,5mM Mg Cl, 0,36mM dNTPs, 10pmol de cada cebador, 0,5 U de Taq Polimerasa, y 2µl de producto de RT; como control de técnica, se amplifi có un fragmento de actina. Se demostró que el CuSO4 induce la expresión del gen de lacasa a nivel transcripcional evidenciado por una banda de 150 pb cinco veces más intensa en los tratamientos adicionados con CuSO4