ASPECTOS BIOQUÍMICOS Y MOLECULARES DE LA PRODUCCIÓN DE LACASAS EEL HONGO DE PUDRICIÓN BLANCA Peniophora sp. BAFC 633 NATIVO DE MISIONES

FONSECA MARÍA I; FARIÑA, JULIA I; CONGOST, GABRIELA C; ZAPATA, PEDRO D; VILLALBA, LAURA L

Posadas

Congreso; XII Congreso Argentino de Micología; 2011

La provincia de Misiones posee un marcado desarrollo industrial basado en la actividad forestal, con un crecimiento anual de alrededor del 10%, siendo una necesidad la implementación de tecnologías limpias. En este sentido, los hongos de pudrición blanca tales como Peniophora sp. BAFC 633 secretan enzimas oxidativas, como Lacasa (Lac), con potencial para actuar como descontaminantes. El cobre incrementa la actividad enzimática de Lac, dependiendo de la concentración a la que se someta el cultivo fúngico.  El objetivo del presente trabajo fue caracterizar los parámetros enzimáticos a partir de extractos de lacasas producidos por Peniophora sp., hongo nativo de Misiones, y determinar el efecto del CuSO4  sobre la expresión del gen de lacasa. Peniophora sp. fue cultivado a 29ºC en medio líquido conteniendo extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de maíz 5 g/L a pH 4,6 durante  10 días, con o sin el agregado de CuSO4 0,5 mM. La actividad Lac fue determinada usando 2,6-dimetoxifenol (DMP) 5 mM en buffer acetato de sodio 0,1 M. El cambio de absorbancia fue monitoreado a 469 nm (E469 = 27,5 mM-1 cm-1 ). Se evaluaron las condiciones óptimas de actividad por medición a diferentes pH, y temperaturas. Luego se determinó la termoestabilidad, previa incubación del extracto por 20 minutos a diferentes temperaturas, realizando mediciones a 30°C en condiciones óptimas de pH.  El efecto del CuSO4 sobre la expresión del gen lac se analizó por medio de RT-PCR, utilizando ARN total semicuantificado, obtenido por extracción a partir de micelio cultivado durante 10 días en medio líquido, con y sin CuSO4. El tratamiento con CuSO4 no produjo cambios significativos en los parámetros de pH y temperatura óptima de Lac, siendo de 3,6 y 55ºC respectivamente (p>0,05). En estas condiciones el CuSO4 aumentó 64 veces la actividad enzimática de Lac (p<0,001). Por otro lado, se observó que hubo diferencias sobre la termoestabilidad, siendo superior a 20°C en medio sin CuSO4 y a 50ºC en medio con cobre (p<0,001). Asimismo quedó demostrado que el gen de lacasa se induce a nivel transcripcional con el agregado de CuSO4