EFECTO DEL COBRE EN LA SECRECIÓN DE ENZIMAS LIGNINOLÍTICAS DE Ganoderma applanatum CEPA A DE IMPORTANCIA BIOTECNOLÓGICA.

TEJERINA, MARCOS R; FONSECA, MARIA I; VILLALBA, LAURA L; ZAPATA, PEDRO D

Congreso; XII congreso argentino de microbiología; 2010

Introducción: Ganoderma applanatum, es un hongo ligninolítico, que presenta un amplio espectro de enzimas como la lacasa (Lac) y manganeso peroxidasa (MnP), aplicables en procesos relacionados con la industria de la pulpa y el papel y los biocombustibles entre otros. Objetivo: Analizar el efecto del cobre sobre la actividad enzimática (Lac y MnP), el crecimiento en biomasa y la secreción de proteínas totales en G. applanatum cepa A Materiales y métodos: La cepa A de G. applanatum BAFC 1168 fue inoculada en medio de cultivo líquido (extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de maíz 5 g/L) durante 7, 10 y 14 días; con 0,2 mM, 0,5mM y sin SO4Cu. La cuantificación de la actividad enzimática de Lac y MnP se determinó por espectrofotometría, utilizando como sustrato DMP (2,6-dimetoxifenol) y SO4Mn respectivamente. Las proteínas totales se cuantificaron mediante la técnica de Bradford, utilizando como solución patrón la albúmina sérica bovina. El crecimiento en biomasa se determinó como peso seco del micelio. El análisis estadístico se realizó mediante el programa estadístico GraphPad Prism 5. Para la detección de isoenzimas Lac fueron sembrados 20 µg de proteína por muestra en zimogramas no desnaturalizante (ND-PAGE al 7,5%). El revelado se realizó sumergiendo el gel en una solución conteniendo DMP 5 mM en buffer acetato 0,1 M, pH 3,6 hasta la aparición de bandas. El peso molecular de las isoenzimas fue determinado en geles desnaturalizante SDS-PAGE.Resultados: El efecto del cobre fue significativo (p <0,001) tanto en el crecimiento en Biomasa como en la secreción de proteínas, produciendo un efecto negativo con el transcurso de los días. El cobre produjo un incremento de actividad enzimática Lac (p <0,001) en concentraciones de 0,2 mM, mientras que en la actividad MnP no produjo un efecto significativo (p > 0,05). Se determinó que el cobre induce isoenzimas Lac que van desde los 70 hasta los 127 KDa. Conclusiones: El cobre produjo un efecto negativo en el crecimiento en Biomasa y secreción proteica, mientras que produjo un efecto positivo en la actividad enzimática Lac, no así en la actividad MnP. El agregado de cobre también produjo la inducción de isoenzimas Lac. Estos resultados motivan a profundizar los estudios incluyendo otras variables para obtener producción enzimática a gran escala y aplicarlas biotecnológicamente a la industria celulósica-papelera o a la primera fase de fabricación de Biocombustible.