USO DE MICROSATÉLITES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE FELINOS SILVESTRES EN LA PROVINCIA DE MISIONES

ESPINOSA, TERESA G; FONSECA, MARIA I; ZAPATA, PEDRO D

Posadas

Jornada; VII Jornadas de Ciencia y Tecnología de la Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales, UNaM.; 2009

Entre los marcadores moleculares más utilizados en biología molecular para identificar a los individuos y analizar su variabilidad, los microsatélites proporcionanresultados eficaces para estos tipos de datos sensibles. Las estrategias para la evaluaciónde la diversidad son cada vez más exigentes para presentar un diagnóstico válido yconfiable en términos de biodiversidad en una población de interés.  El presente trabajo tuvo como objetivos: 1) diseñar marcadores molecularesmicrosatélites para gato doméstico, 2) amplificar y comparar entre los gatos en la regiónde Paraná, 3) estandarizar la purificación de ADN genómico de pelo, heces y muestras desangre, 4) optimizar de la PCR de las regiones seleccionadas de Felis catus (gatodoméstico) y 5) comprobar su transferencia  a felinos salvajes de la región de Paraná.  Los ejemplares de gato doméstico (Felis catus), yaguareté (Panthera onca), puma(Puma concolor), ocelote (Leopardus pardalis), margay (Leopardus wiedii), tirica(Leopardus tigrinus), yaguarundi (Herpeilurus yaguarondi) fueron seleccionados paraeste estudio.  Las muestras a partir de sangre periférica fueron sometidas a extracción ypurificación de ADN mediante la técnica de Salting-out (Miller-Dykes, 1988) conmodificaciones. En cuanto a las muestras obtenidas de otros tejidos, se utilizaron lasdescriptas por Bloom et al (1990) y Shankaranarayanan et al (1998). La calidad y purezadel ADN fueron analizadas con espectrometría a 260 nm y 280 nm.Las muestras fueronsometidas a reacciones de PCR en el Termociclador Techne Progene. Las amplificacionestuvieron un volumen final de 15 μl con las siguientes proporciones para cada reactivo:200 uM de cada nucleótido, 5 pmoles de cada cebador, 2 o 3 mM de MgCl, 1 ul de ADN y0,5 unidades de la Taq ADN polimerasa (Genbiotech). Los microsatélites fueron2amplificados siguiendo un protocolo de tipo Touch Down.  La purificación de ADN a partir de sangre periférica anticoagulada con EDTA 1% y /o citrato de sodio, dieron buenos resultados en la extracción de ADN en términos de lapurificación y el rendimiento de la extracción en todos los especímenes de este estudio.Mientras que en las extracciones a partir de otros tejidos, utilizando tiocianato deguanidina y una resina sintética, Chelex ®, arrojaron también buenos resultados, debido aque son efectivos en cuanto a la eliminación de polifenoles, que interfieren en posterioresensayos como las amplificaciones por PCR.  Los marcadores moleculares utilizados en este estudio fueron empleados pordiversos autores como marcadores de polimorfismo. En nuestro estudio estos cebadoresarrojaron buenos resultados para la observación de la variabilidad entre especies eindividuos. Amelogenina ha sido bueno como marcador para identificación de sexo, apartir de datos obtenidos por Pilgrim et al., 2005. Los métodos de purificación utilizados en este trabajo han sido positivos en términos depurificación y el rendimiento. La genética de la conservación se ha centrado en la ecología y la persistencia de laevolución de las metas (de especies u otras unidades intraespecífica), especialmentecuando el tráfico en estrecha colaboración con especies muy extendidas, no es unproblema ampliamente conocido en los esfuerzos de conservación se centran en variosobjetivos genéticos bien documentado.