Cuantificación de la actividad enzimática y amplificación de fragmetos génicos de lacasa y manganeso peroxidasa en Peniophora sp

FONSECA, MARÍA I; TEJERINA, MARCOS R; RAMOS A. B; SANABRIA N.I; FARIÑA J.I; VILLALBA L.L; ZAPATA P.D

Posadas

Jornada; VII Jornadas de Ciencia y Tecnología de la Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales, UNaM.; 2009

Los hongos de pudrición blanca presentan un amplio espectro de enzimas como lacasa (Lac) y manganeso peroxidasas (MnP), con aprovechamiento biotecnológico enprocesos como el biopulpado, bioblanqueo y biorremediación. El objetivo del trabajo fue cuantificar esta actividad enzimática y obtener unfragmento de los genes de lac y mnp del hongo de pudrición blanca Peniophora sp.  Para ello Peniophora sp fue cultivado en medio líquido (extracto de malta 12,7 g/Lextractosoluble de maíz 5 g/L pH 3,5) por 7, 10 y 14 días a 25ºC en condicionesestáticas. La actividad enzimática lacasa se determinó por espectrofotometría a 459 nmusando como sustrato 2,6–dimetoxifenol 5 mM en  buffer acetato de sodio 0,1M (pH 3,6)y la MnP a 610 nm usando rojo fenol 0,1 M en buffer succinato 0,1M (pH 4,5). El análisisestadístico fue realizado mediante el programa GraphPad Prism 4. Para la amplificaciónpor PCR se extrajo DNA de micelio. No se observó diferencias significativas (P > 0.05) en la actividad enzimática entrelos distintos días.  La actividad lacasa fue de 60 U/L y la de MnP de 45 U/L. Por otro ladose obtuvieron amplicones de 200 y 300 pb para la Lac y MnP respectivamente que fueronsecuenciados. El análisis bioinformático mediante megablast mostró una identidad de83% para lac y de 96%  para  mnp con otros hongos de pudrición blanca. Las secuencias génicas son fundamentales para analizar la regulación a nivelgenético de éstas enzimas y evaluar posibles inductores para incrementar la producción.