Cuantificación de la actividad enzimática y amplificación de fragmentos génicos de lacasa y manganeso peroxidasa en Peniophora sp

FONSECA MI, MR TEJERINA, AB RAMOS, NI SANABRIA, JI FARIÑA LL VILLALBA, PD ZAPATA.

Tucumán

Congreso; XXXVIII Congreso Argentino de Genética; 2009

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0pt; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} p.MsoPlainText, li.MsoPlainText, div.MsoPlainText {margin:0pt; margin-bottom:.0001pt; text-align:justify; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Courier New"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-bidi-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 85.05pt 70.85pt 85.05pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Los hongos de pudrición blanca presentan un amplio especto de enzimas como lacasa (Lac) y mangenoso peroxidasas (MnP), con aprovechamiento biotecnológico en procesos como el biopulpado, bioblanqueo y biorremediación. El objetivo del trabajo fue cuantificar esta actividad enzimática y obtener un fragmento de los genes de lac y mnp del hongo de pudrición blanca Peniophora sp. Para ello Peniophora sp fue cultivado en medio líquido (extracto de malta 12,7 g/L-extracto soluble de maíz 5 g/L pH 3,5) por 7, 10 y 14 días a 25ºC en condiciones estáticas. La actividad enzimática lacasa se determinó por espectrofotometría a 459 nm usando como sustrato 2,6–dimetoxifenol 5 mM en  buffer acetato de sodio 0,1M (pH 3,6) y la MnP a 610 nm usando rojo fenol 0,1 M en buffer succinato 0,1M (pH 4,5). El análisis estadístico fue realizado mediante el programa GraphPad Prism 4. Para la amplificación por PCR se extrajo DNA de micelio. No se observó diferencias significativas (P > 0.05) en la actividad enzimática entre los distintos días.  La actividad lacasa fue de 60 U/L y la de MnP de 45 U/L. Por otro lado se obtuvieron amplicones de 200 y 300 pb para la Lac y MnP respectivamente que fueron secuenciados. El análisis bioinformático mediante megablast mostró una identidad de 83% para lac y de 96%  para  mnp con otros hongos de pudrición blanca. Las secuencias génicas son fundamentales para analizar la regulación a nivel genético de éstas enzimas y evaluar posibles inductores para incrementar la producción.