Estudio del efecto de distintas condiciones de pH y temperatura en la actividad enzimática de Lac en Pycnoporus sanguineus mediante su cuantificación y análisis de zimogramas.

FONSECA MI; NI SANABRIA , ; AB RAMOS; MR TEJERINA,; LL VILLALBA; PD ZAPATA.

Facultad de Bioquímica, Quimica y Farmacia (UNT).

Congreso; VI Congreso Nacional de Estudiantes de Bioquímica y Biotecnología. X Jornadas Científicas y Encuentro de Investigadores “Augusto Palavecino”; 2009

&amp;amp;amp;amp;lt;!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Calibri; panose-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-1610611985 1073750139 0 0 159 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:10.0pt; margin-left:0cm; line-height:115%; mso-pagination:widow-orphan; mso-hyphenate:none; font-size:11.0pt; font-family:Calibri; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-bidi-font-family:Calibri; mso-ansi-language:ES-TRAD; mso-fareast-language:AR-SA;} @page Section1 {size:595.25pt 841.85pt; margin:172.95pt 5.0cm 172.95pt 5.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&amp;amp;amp;amp;gt; Introducción:Pycnoporus sanguineus, hongo ligninolítico; presenta un amplio espectro de enzimas como la lacasa (Lac), aplicables en procesos biotecnológicos como el biopulpado, bioblanqueo y biorremediación. Objetivos: Estudiar el efecto de distintas condiciones de pH y temperatura sobre la actividad enzimática de Lac en P. sanguineus mediante su cuantificación y análisis de zimogramas. Materiales y métodos: P. sanguineus BAFC 2126 fue cultivado en medio líquido (extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de maíz 5 g/L) durante 7, 10 y 14 días. Las condiciones de pH fueron: 3,5; 4,5; 5,5 y las de temperatura: 25ºC, 29ºC, 33ºC. La cuantificación de la actividad enzimática de Lacasa fue determinada por espectrofometría a 469 nm utilizando como sustrato DMP (2,6-dimetoxifenol) 5 mM  en buffer acetato 0,1 M (pH 3,6). La proteínas totales se cuantificaron a 595 nm mediante la técnica de Bradford, utilizando como solución patrón albúmina sérica bovina. El análisis estadístico se realizó mediante el programa estadístico GraphPad Prism 4. Para la detección de isoenzimas fueron sembrados 20 µg de proteína por muestra en zimogramas (ND-PAGE al 7,5%). El revelado se realizó sumergiendo el gel en una solución conteniendo  DMP 5 mM  en buffer acetato 0,1 M hasta la aparición de bandas. Resultados: El día 14 a 25 ºC pH 5.5, 29 ºC y 33 ºC pH 3.5 se registró mayor secreción proteica (60 µg/mL). La mayor producción enzimática de Lac se observo el día 7 a 25 ºC, pH 3,5 (514 U a P<0.001). A pH 3.5 y 4.5 a 29 y 33 ºC el día 14 fué de mayor producción (118 U y 214 U respectivamente), sin diferencias significativas (P>0.05). Como patrón isoenzimático registramos bandas de expresión constitutiva en todos los tratamientos encontrándose una isoenzima a pH 4,5. Conclusión: Mediante la cuantificación enzimática pudieron detectarse diferencias de actividad de enzima Lacasa frente a diversas condiciones de pH y temperatura. Asimismo, se observaron isoenzimas correspondientes producidas bajo dichas condiciones. Estos resultados motivan a profundizar los estudios incluyendo otras variables para obtener la producción enzimática óptima y aplicarla biotecnológicamente a la industria celulósica-papelera.