Caracterización genómica de lacasas y xilanasas de hongos de pudrición blanca para usos biotecnológicos.

GIORGIO E. M; SHIMIZU E., ; PREUSSLER C; MARTINA P; FONSECA M.I; VILLALBA L.L; ZAPATA P. D.

Lima, Perú

Congreso; 13º Congreso Latinoamericano de Genética; 2008

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0pt; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 85.05pt 70.85pt 85.05pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La biotecnología propone procesos innovadores para atenuar el impacto de la industria celulósico-papelera altamente contaminante. Los hongos de pudrición blanca son organismos de amplia capacidad lignocelulolitica con enzimas aprovechables en estos procesos. Este trabajo profundiza en la genética de los sistemas lignoceluloliticos de especies fúngicas con aplicación biotecnológica. Se utilizaron especies de elevada capacidad degradativa frente a Poly R-478, azul de bromofenol y verde de malaquita, iniciándose los estudios de caracterización genomica de lacasas y xilanasas. Se trabajó con cebadores degenerados para fragmentos genicos de ambas enzimas: para lacasa se utilizaron cebadores descriptos para el dominio conservado de union al cobre. Para xilanasas se diseñaron 4 cebadores para el dominio 3-glicosilhidrolasa, realizandose la selección a partir del estudio bioinformático con el programa ClustalX 1.83 y la base de datos Conserved Domain del NCBl tomando como referencia el dominio hidrolasa de la enzima endo-1 ,4-B-xilanasa B de Phanerochaete chrysosporium. Para verificar la funcionalidad de los cebadores y la amplificabilidad del DNA se realizaron PCR, observándose amplicones de aproximadamente 200pb para lacasa. Los cebadores diseñados para xilanasas permitieron obtener amplicones de tamaños variables en todos los genomas. Si bien se estimaron tamaños de bandas entre 400 y 500pb, no se puede descartar la presencia de inserciones o intrones, razón por la cual se confirma mediante clonación y secuenciación. Nuestros resultados apuntan a lograr la selección de clones que pudieran contener secuencias promotoras e iniciar estudios de expresión genica, útiles para potenciar la producción industrial de estas enzimas.