ESTANDARIZACIÓN DE MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE DNA PARA LA AMPLIFICACIÓN DE MARCADORES STR EN Pinus taeda.

MARÍA ISABEL FONSECA; ALEJANDRO ALBERTO TORO; HORACIO LEONARDO WALANTUS; PEDRO DARIO ZAPATA

Posadas

Jornada; SEGUNDAS JORNADAS NACIONALES DE ESTUDIANTES DE BIOLOGÍA; 2007

La forestoindustria representa uno de los pilares económicos de la Provincia de Misiones, contándose actualmente con 330.000 ha de plantaciones forestales, en su mayoría pinos y araucarias. Sin embargo, no se ha alcanzado el nivel de desarrollo biotecnológico queconjuguela calidad genética con características fenotípicas de excelencia en las especies maderablesdela Provincia. En este sentido, los marcadores moleculares polimórficos informan sobre lavariabilidad de la población en estudio pudiendo analizarse su posible asociación con rasgosfenotípicos deseables que favorezcan su uso forestal.Los marcadores STR son secuencias de 2-6 pb repetidas en tándem usualmente enextensiones de hasta 100 pb, distribuidos por todo el genoma y flanqueadas por secuenciasaltamente conservadas, siendo raros en las regiones codificantes. Su variabilidad se debe alcambio del número de las unidades de la repetición, pudiendo abalizárselas fácilmente porPCRusando primers específicos a las secuencias únicas que flanquean los STRs.La identificación y caracterización molecular de la diversidad genética de plantasinvolucran la evaluación de numerosos individuos necesitándose métodos rápidos y precisosdeextracción de DNA. Las hojas de las coníferas contienen polifenoles, ácidos y resinas quepueden comprometer la extracción del DNA e inhibir la acción de la Taq polimerasa.En razón de la problemática planteada evaluamos diferentes métodos de extracción deDNA, a partir de Pinus taeda y determinar los parámetros que permiten obtener cantidad ycalidad adecuada de DNA para así caracterizar a nivel molecular diferentes poblaciones de laprovincia utilizando STRs.El protocolo de extracción se basó en la utilización del CTAB (bromuro decetiltrimetilamonio), aplicándose diferentes modificaciones. Las diferencias básicasobservadasestuvieron en la composición del tampón de extracción y en la purificación del DNA.Se obtuvieron bandas de DNA genómico en cantidad y calidad adecuada para PCR ycuando se realizó la amplificación utilizando los primers RIPPTs 1, 31, 65, 77, 79 (BV683040,BV683043, BV683047, BV683052, BV683053) con DNA extraído de acículas se observaronbandas que corresponden a los tamaños (pb) esperados de los amplicones 263, 175, 261, 142,153 respectivamente. Estos resultados indican que el método de extracción de DNA utilizado es eficiente para uso posterior de STRs en estudios poblacionales de Pinus taeda.