DISEÑO DE CEBADORES DEGENERADOS PARA EL FACTOR DE TRANSCRIPCION ACE-1 Y DETERMINACION DE ISOENZIMAS INDUCIBLES CON CU+2 EN PENIOPHORA SP.

FONSECA MI, RAMOS AB, TEJERINA M, VILLALBA LL Y ZAPATA PD.

Viña del Mar, Chile

Congreso; XXXIX CONGRESO LATINOAMERICANO DE GENÉTICA.; 2010

Peniophora sp presenta enzimas ligninolíticas como la Lacasa (Lac) inducible con Cu+2 y posiblemente regulado por el factor de transcripción ACE-1. <!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Calibri; panose-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-1610611985 1073750139 0 0 159 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0pt; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-ansi-language:ES-AR; mso-fareast-language:ES;} p.MsoPlainText, li.MsoPlainText, div.MsoPlainText {mso-style-link:"Plain Text Char"; margin:0pt; margin-bottom:.0001pt; text-align:justify; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Courier New"; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-bidi-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} span.PlainTextChar {mso-style-name:"Plain Text Char"; mso-style-locked:yes; mso-style-link:"Texto sin formato"; font-family:"Courier New"; mso-ascii-font-family:"Courier New"; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-hansi-font-family:"Courier New"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES; mso-bidi-language:AR-SA;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 85.05pt 70.85pt 85.05pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Objetivo: diseñar cebadores para amplificar el gen ace-1 en Peniophora sp y determinar el perfil isoenzimático en cultivos inducidos con Cu+2. Para diseñar los cebadores se contrastó la secuencia aminoacídica de ACE-1 de Phanerochaete chrysosporium mediante el BLASTp. Se seleccionó y alineó las secuencias similares utilizando el T-Coffee. Con la secuencia consenso se diseñaron los cebadores degenerados y el análisis in silico se realizó mediante el programa Primer3. El hongo se inoculó en medio líquido extracto de malta 12,7 g/L-extracto soluble de maíz 5 g/L 29ºC pH 4,6 por 7, 10 y 14 días, con o sin el agregado de 0,02 mM, 0,1 mM y 0,3 mM de SO4Cu2. La proteínas secretadas se determinaron por el método de Bradford y se analizó el perfil isoenzimático en geles SDS-PAGE 7,5% revelados con 2,3-dimetoxifenol 5 mM en buffer acetato 0,1 M pH 3,6. Se obtuvieron cebadores con 16% de degeneración. Se revelaron dos isoenzimas de 60 y 75 kDa. Estos resultados demuestran la capacidad del cobre para inducir una respuesta de isoenzimas de Lac.