Identification of extracellular ribonucleoprotein complexes involved in host – parasite interaction

MARIA EUGENIA ANCAROLA; CUCHER, MARCELA A.; FRANCHINI, GISELA

Seminario; Progress report; 2022

La comunicación intercelular es crucial en múltiples aspectos de la biología celular, incluyendo la comunicación entre especies como en la dinámica que se establece entre parásitos y hospederos, en donde la señalización entre organismos es fundamental para el establecimiento y persistencia de los patógenos. Anteriormente, reportamos que los parásitos cestodos secretan ARNs pequeños encapsulados en VE. Sin embargo, la secreción de VE depende de la morfología del estadio estudiado de acuerdo a la cual los parásitos pueden priorizar la secreción de ARNs pequeños en cRNP solubles. Un factor común que tienen ambos mecanismos es que los ARNs se encuentran asociados a una proteína transportadora, como se reportó para miRNAs secretados en VE de diversos tipos celulares de vertebrados y recientemente para miRNAs secretados en VE de nematodos. Dada la importancia que tendría el intercambio de ARNs pequeños entre parásito-hospedero, proponemos estudiar dicho mecanismo en distintas especies de helmintos representantes de los grupos Cestoda y Nematoda: los cestodos Taenia crassiceps, modelo de laboratorio para el estudio de la cisticercosis, y Echinoccocus multilocularis, agente causal de la equinococosis alveolar, y el nematodo D. renale, parásito de animales de compañía con potencial zoonótico y alta prevalencia en la provincia de Buenos Aires.Para ello se realizó la separación de homogenatos citoplasmáticos de parásito por cromatografía de exclusión molecular (SEC) y se identificaron fracciones positivas como aquellas que contenían tanto proteínas como ARN. A partir de los mismos homogenatos citoplasmáticos se realizó el aislamiento de proteínas de unión específica a microRNAs mediante cromatografía de afinidad al ARN. Las proteínas aisladas por ambos métodos serán identificadas mediante LC-MS/MS. Por otro lado, se realizó el cultivo celular primario in vitro de E. multilocularis en presencia de medio de cultivo condicionado por células del hospedero y se determinó que los factores esenciales para la sobrevida del parásito se encuentran en la fracción extracelular de proteínas solubles y no así en vesículas extracelulares.