Galectina-8 modula la internalización de cd166 en células tumorales mamarias

FERRAGUT F; BRACALENTE C; ESPELT MV; TRONCOSO MF; WOLFENSTEIN-TODEL C; MALCHIODI E; RABINOVICH GA; FERNÁNDEZ M; ELOLA MT

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica-LXII Reunión Anual Sociedad Argentina de Inmunología; 2014

Galectina-8 (Gal-8) es una galectina con dos dominios de reconocimiento a carbohidratos en tándem, vinculada a procesos tumorales. Nuestro grupo describió la glicoproteína CD166 (ALCAM) como un ligando de Gal-8. En el presente trabajo, nos propusimos analizar la internalización de CD166 en células tumorales mamarias humanas MDA-MB-231, en presencia y ausencia de Gal-8. Nuestros objetivos fueron: 1) Estandarizar un ensayo de internalización basado en anticuerpos; 2) Analizar la co-localización de CD166 con distintos marcadores de endosomas; 3) Evaluar el efecto de Gal-8 exógena en la internalización de CD166. Los ensayos se efectuaron mediante inmunofluorescencia en microscopía confocal. En todos los casos y sobre hielo, las células MDA-MB-231 se trataron con Gal-8 o PBS durante 30 min; luego, las células fueron incubadas con anti-CD166-ficoeritrina (PE). La internalización se indujo a 37°C durante 0-60 min; los controles se incubaron en hielo. Finalmente, las células se fijaron, permeabilizaron e incubaron con diferentes anticuerpos para evaluar el tráfico intracelular. Encontramos que: 1- En ausencia de Gal-8, CD166 se internalizó en parte hacia endosomas tempranos (revelados con un anticuerpo anti-EEA1), detectándose co-localización parcial de CD166 y EEA1. 2- Al incubar con Gal-8, se observó una pronunciada localización de CD166 en la superficie celular y escasa endocitosis al cabo de 40 min a 37°C, lo cual significó un retardo de la internalización de CD166. Las células tratadas con Gal-8 presentaron co-localización disminuida de CD166 con EEA1 en comparación con células no incubadas con la lectina, confirmando que la internalización de CD166 resultó restringida. Estos resultados nos permitirían concluir que: las interacciones glicanos/Gal-8 funcionan reteniendo a las glicoproteínas como CD166 en la superficie de las células MDA-MB-231, evitando así su endocitosis, lo cual podría tener implicancias en la adhesión celular.