ACTIVACIÓN DE LA CASPASA-8 EN LA APOPTOSIS INDUCIDA POR LOS INHIBIDORES DE TRISPINA DE LA SOJA Y DE PELTOPHORUM DUBIUM EN CÉLULAS JURKAT DE LEUCEMIA HUMANA

TRONCOSO, MARÍA FERNANDA; LONGHI, SILVIA; YOSHIZAKI, LUCILA; RETEGUI, LILIA; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA

Mar del Plata, BsAs

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

La apoptosis puede ser inducida por la vía intrínseca mitocondrial o por “receptores de muerte”. Previamente demostramos que los inhibidores de tripsina de la soja (SBTI) y de la leguminosa Peltophorum dubium (PDTI) inducen apoptosis de las células Nb2 de linfoma de rata y de las células Jurkat de leucemia humana (SAIB 2003). El objetivo del presente trabajo fue examinar el mecanismo molecular de dicha apoptosis. Para ello se determinó el incremento de las actividades de las caspasas-3 y -8 causado por incubación de las células Jurkat con PDTI o SBTI 25 mM, utilizando un método fluorométrico. La actividad de caspasa-3 luego de 6 hs aumentó de 9,7 ± 0,3 unidades de fluorescencia relativa para el control a 44,2 ± 5,2 (p<0,001) unidades en presencia de SBTI mientras que PDTI causó un incremento menor, llegando a 29,5 ± 2,5 (p<0,001) unidades. En cambio, la actividad de caspasa-8 aumentó de 1,3 ± 0,7 unidades de fluorescencia relativa a 6,7 ± 1,5 y 6,9 ± 0,3 (p<0,001) unidades en presencia de SBTI y PDTI respectivamente. Para determinar cambios en el potencial de la membrana mitocondrial se utilizó el fluorocromo catiónico DiOC6(3) y se observó que luego de 3 hs ambos inhibidores producían un leve descenso de dicho potencial (13 ± 4 y 16 ± 5 % respectivamente), sin mayor descenso luego de 6 ó 18 hs de incubación. Sin embargo no se detectó, por Western blot, un aumento significativo del citocromo c citosólico después de 3, 4, 6, 18 ó 24 hs de tratamiento. Para comprobar si este efecto es específico del PDTI y del SBTI, se ensayó otro inhibidor, también de tipo Kunitz, aislado de Pterogyne nitens, el que no disminuyó la viabilidad de estas células. Los resultados sugieren que estos inhibidores activan a la caspasa iniciadora de tipo-8 (vía mediada por receptor) y que la vía intrínseca mitocondrial no sería la predominante en este proceso apoptótico.