Galectina-8 modula la internalización de CD166 en celulas tumorales mamarias

FERRAGUT, FÁTIMA; BRACALENTE, CANDELARIA; ESPELT, MARÍA V.; TRONCOSO, MARÍA F.; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA; MALCHIODI, EMILIO L.; RABINOVICH, GABRIEL A.; FERNÁNDEZ, MARISA M.; ELOLA, MARÍA TERESA

MAR DEL PLATA

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

    Galectina-8 (Gal-8) es una galectina con dos dominios de reconocimiento a carbohidratos en tandem. Hemos descripto a la glicoproteína CD166 (ALCAM) como un ligando de Gal-8, analizando parámetros de esta interacción. El objetivo de este trabajo es el análisis de la internalización de CD166 en células tumorales mamarias humanas MDA-MB-231, en presencia y ausencia de su ligando Gal-8. Nuestros objetivos fueron: 1) Estandarizar un ensayo de internalización basado en anticuerpos; 2) Analizar la co-localización de CD166 con distintos marcadores de endosomas; 3) Evaluar el efecto de Gal-8 exógena en la internalización de CD166. Los ensayos se efectuaron mediante inmunofluorescencia en microscopía confocal. Primeramente, las células MDA-MB-231 se trataron con Gal-8 o PBS durante 30 min, en hielo; luego, las células fueron incubadas con anti-CD166-ficoeritrina (PE) en hielo. La internalización se indujo a 37°C durante 0-60 min; los controles se mantuvieron en hielo. Finalmente, las células se fijaron, permeabilizaron e incubaron con diferentes anticuerpos. Nuestros resultados muestran que la internalización de CD166 puede ser evaluada con anti-CD166-PE, primeramente incubado en hielo y luego a 37°C. En ausencia de Gal-8, CD166 se internalizó en parte hacia endosomas tempranos (revelados con anti-early endosome antigen 1, EEA1), detectándose co-localización parcial de CD166 y EEA1. Al incubar con Gal-8, se observó una pronunciada localización de CD166 en la superficie celular y escasa endocitosis aún al cabo de 40 min a 37°C; por ende, la internalización de CD166 se encontró impedida. Las células tratadas con Gal-8 presentaron co-localización disminuida de CD166 con EEA1 en comparación con células no incubadas con la lectina, confirmando que la internalización de CD166 resultó restringida. Concluyendo, las interacciones glicano/Gal-8 funcionan atrapando a glicoproteínas específicas tales como CD166 en la superficie de las células MDA-MB-231, evitando así su endocitosis.