EFECTO DE PRIMING DE UNA GALECTINA-1 SOBRE LA LIBERACIÓN DE LISOZIMA EN PMN HOMÓLOGOS ACTIVADOS CON PMA.

CHIESA, M. E.; ELOLA, M. T.; FINK, N. E.

MAR DEL PLATA

Congreso; REUNIÓN XLIV DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA; 1999

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA

Las galectinas poseen especificidad b-galactosídica y secuencias consenso distintivas. Se estudió la estimulación de PMN porcinos con la galectina-1 esplénica homóloga, aislada en este laboratorio, en la liberación de lisozima medida mediante la lisis de Microccocus lysodeikticus. El 100% de liberación se obtuvo por incubación de PMN en Triton X-100 0,2%. Los ensayos de liberación de lisozima de PMN se estandarizaron utilizando activadores conocidos como el tripéptido formil-metionin-leucilfenilalanina (fMLP: 1000-25 μM) y el forbol-12 miristato-13 acetato (PMA: 324-32,4 μM). Las incubaciones con fMLP se efectuaron con y sin citocalasina B (CB, 5 μg/ml). El fMLP con CB produjo un porcentaje máximo de liberación de 45 + 31 a una concentración de 250 μM (n=3-10). No se obtuvieron diferencias significativas entre los porcentajes de secreción (17-9%) para las distintas concentraciones de PMA (n=5). La galectina-1 porcina fue activa solamente a concentraciones ³ 2,5 μM (15 + 13%, n=4). El priming de PMN con galectina-1 (1 μM) durante 15 min. y posterior activación con dosis subóptimas de PMA (0,1 μM) produjeron un 15 + 9 % (n=4) de secreción de enzima, mientras que las mismas dosis de cada uno de estos activadores utilizados en forma independiente no tuvieron efecto. b-galactosídica y secuencias consenso distintivas. Se estudió la estimulación de PMN porcinos con la galectina-1 esplénica homóloga, aislada en este laboratorio, en la liberación de lisozima medida mediante la lisis de Microccocus lysodeikticus. El 100% de liberación se obtuvo por incubación de PMN en Triton X-100 0,2%. Los ensayos de liberación de lisozima de PMN se estandarizaron utilizando activadores conocidos como el tripéptido formil-metionin-leucilfenilalanina (fMLP: 1000-25 μM) y el forbol-12 miristato-13 acetato (PMA: 324-32,4 μM). Las incubaciones con fMLP se efectuaron con y sin citocalasina B (CB, 5 μg/ml). El fMLP con CB produjo un porcentaje máximo de liberación de 45 + 31 a una concentración de 250 μM (n=3-10). No se obtuvieron diferencias significativas entre los porcentajes de secreción (17-9%) para las distintas concentraciones de PMA (n=5). La galectina-1 porcina fue activa solamente a concentraciones ³ 2,5 μM (15 + 13%, n=4). El priming de PMN con galectina-1 (1 μM) durante 15 min. y posterior activación con dosis subóptimas de PMA (0,1 μM) produjeron un 15 + 9 % (n=4) de secreción de enzima, mientras que las mismas dosis de cada uno de estos activadores utilizados en forma independiente no tuvieron efecto. ³ 2,5 μM (15 + 13%, n=4). El priming de PMN con galectina-1 (1 μM) durante 15 min. y posterior activación con dosis subóptimas de PMA (0,1 μM) produjeron un 15 + 9 % (n=4) de secreción de enzima, mientras que las mismas dosis de cada uno de estos activadores utilizados en forma independiente no tuvieron efecto.